PCR za hepatitis B

Razpoložljivost sodobnih zdravil proti hepatitisu B (HBV) z jasnimi indikacijami za njihovo dajanje zahteva natančno in hitro preverjanje diagnoze. Vendar pa se zaradi pomanjkljivih kliničnih podatkov v prvih tednih bolezni in metod analize z omejenim imunskim preskusom stopnja diagnoze zmanjša.

Prisotnost markerjev anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe vam omogoča potrditev HBV ali ugotovitev dejstva prejšnje bolezni. Vendar pa je možno ugotoviti prisotnost aktivnih virusnih delcev v krvi in ​​prešteti njihovo število v času študije s PCR - kvantitativni test v realnem času za odkrivanje hepatitisa B. Metoda v primerjavi z diagnostičnimi metodami ELISA rešuje diagnostične težave in omogoča napovedovanje poteka bolezni med prejemanjem protivirusna zdravila.

Osnove diagnostike bolezni

Diagnoza hepatitisa B temelji na oceni kliničnih manifestacij, encimske imunske preiskave in instrumentalnih metod raziskovanja. Bolezen poteka v akutni fazi po inkubacijski dobi in, odvisno od odmerka okužbe in učinkovitosti zdravljenja, vstopi v kronično fazo. Glavni cilj zdravljenja je preprečiti kroničenje, to je izločanje vseh virusnih delcev iz krvi. Klinični potek bolezni je zdravilo brez naknadne viremije.

Dejstvo, da je okužba odpravljena, je treba dokazati s kvantitativno metodo raziskovanja.

Ker katerakoli kvalitativna encimska imunska preiskava omogoča diagnozo HBV posredno, torej ne kaže prisotnosti patogena v notranjem okolju telesa, ampak označuje imunski odziv na okužbo, spremljanje učinkovitosti terapije in dejstvo, da je zdravljenje težko dokazati. Zato je treba bolnika s hepatitisom B ali ob prisotnosti diagnostičnih meril v svojo korist opraviti verižna reakcija s polimerazo, da bi količinsko opredelili število virusnih delcev v krvi. Diagnostična stopnja je pomanjkanje kopij DNK okužbe.

Opis diagnostične metode

Zelo občutljiva metoda PCR diagnoze hepatitisa B spada v kategorijo gensko spremenjenih molekularno-bioloških študij. Skozi to določimo količino virusne DNA v biološkem materialu pacienta in dopustno hitrost. Glede na dobljene rezultate se ugotovi število virusnih delcev na enoto prostornine. Material za diagnostični test je venska kri bolnika. Vnos je zaželen na prazen želodec zaradi možnega učinka chyle seruma na rezultat študije.

Dobljeni rezultati morajo biti posredovani zdravniku za interpretacijo in določitev nadaljnje taktike. Neodvisno dekodiranje ne predstavlja diagnostične vrednosti.

Pomen števila virusnih delcev, dobljenih z metodo PCR, presega vrednost encimskih imunotestov. Ker analiza v realnem času prikazuje prisotnost povzročitelja bolezni v krvi, je njena vsebnost informacij višja od drugih. Če test ELISA pokaže le prisotnost protiteles, ki se opazijo od 4 tednov inkubacijskega obdobja in traja več kot 8 tednov po odstranitvi virusa iz krvi, potem verižna reakcija s polimerazo jasno potrjuje aktivni potek bolezni ali njeno zdravljenje, označuje dinamiko predpisanega zdravljenja.

Polimerizna verižna reakcija s kvantitativno določitvijo delcev patogenov rešuje diagnostična vprašanja v prid ustavitvi zdravljenja zaradi okrevanja ali nadaljevanja zdravljenja zaradi pomanjkanja učinkovitosti. Metoda je čim bolj specifična za virus HBV in se odlikuje po sprejemljivi napaki.

Indikacije in cilji uspešnosti

Kvantitativna analiza hepatitisa B je najbolj zanesljiva in omogoča potrditev podatkov, pridobljenih z metodami ELISA. Imenovan je, ko:

1. pridobitev pozitivnega diagnostičnega rezultata ELISA;
2. zdravljenje bolnika z ugotovljeno diagnozo virusne poškodbe jeter;
3. pri diagnozi mešane etiologije hepatitisa;
4. po potrebi določite virusno obremenitev pri bolniku.

Ker se metoda encimske imunske metode bolj uporablja v praksi specialista za nalezljive bolezni, je mogoče nekatere bolnike z blago boleznijo zdraviti, ne da bi morali prešteti virusno obremenitev. Toda PCR na splošno velja za „zlati standard“ diagnostike v hepatologiji, saj zaradi edinstvenosti njegovega rezultata odpravlja številna organizacijska vprašanja. Zato ima usmeritev bolnika za kvantitativno analizo naslednje cilje:

• pridobivanje podatkov o številu virusnih delcev v krvi pacienta;
• potrditev akutnega poteka hepatitisa in pravočasno preverjanje kronične bolezni;
• stalno odkrivanje latentnih nosilcev virusa s pozitivnimi testi ELISA, spremljanje njihove viremije;
• odločanje o imenovanju protivirusnega zdravljenja, njegovi kombinaciji in prenehanju.

Najpomembnejši cilj uporabe kvantitativnega testa PCR za odkrivanje HBV je določitev možnih kombinacij zdravljenja. V primeru visokega virusnega bremena rezultat analize daje specialistu možnost, da nadaljuje s kombinacijo zdravil. Med zdravljenjem je enostavno določiti učinkovitost predpisanega farmakološkega zdravljenja, ki temelji na rezultatu PCR. Vodeno le s podatki o imunoloških metodah, je nemogoče pravočasno določiti dejstvo zdravljenja in njegovo trenutno učinkovitost. Zato je kvantitativni test v realnem času potrebna analiza pred začetkom zdravljenja akutnega hepatitisa, latentne virusne okužbe z visoko viremijo in kroničnega HBV.

Interpretacija rezultatov kvantitativnih testov PCR

Razlago rezultatov kvantitativnega testa PCR mora opraviti lečeči zdravnik bolnika. Potrebno je ovrednotiti diagnostični indikator in določiti terapevtske taktike.

Standardni analizator je sposoben proizvesti kvantitativni kazalnik, ki odraža število kopij virusne DNA, ki so prisotne v preučevani venski krvi. Merske enote - kopije / ml, ie / ml (kopije na mililiter, mednarodne enote na mililiter). Razlaga rezultatov je podana v tabeli z navedbo različnih merskih enot.

Študije o virusu hepatitisa B (ELISA in PCR) t

Antigen virusa hepatitisa B (s) (HBsAg)

Površinski antigen hepatitisa B v serumu običajno ni prisoten.
Zaznavanje površinskega antigena hepatitisa B (HBsAg) v serumu potrjuje akutno ali kronično okužbo z virusom hepatitisa B.

Pri akutni bolezni se HBsAg odkrije v serumu v zadnjih 1-2 tednih obdobja inkubacije in prvih 2-3 tednih kliničnega obdobja. Kroženje HBsAg v krvi je lahko omejeno na nekaj dni, zato si morate prizadevati za zgodnji začetni pregled bolnikov. Metoda ELISA omogoča odkrivanje HBsAg pri več kot 90% bolnikov. Skoraj pri 5% bolnikov najobčutljivejše raziskovalne metode ne odkrijejo HBsAg, v takih primerih pa etiologijo virusnega hepatitisa B potrjuje prisotnost anti-HBcAg JgM ali PCR.

Koncentracija HBsAg v serumu pri vseh oblikah resnosti hepatitisa B na višini bolezni ima velik razpon nihanj, vendar obstaja določen vzorec: v akutnem obdobju obstaja obratna povezava med koncentracijo HBsAg v serumu in resnostjo bolezni.

Visoke koncentracije HBsAg so pogostejše pri blagih in zmernih oblikah bolezni. V hudih in malignih oblikah je koncentracija HBsAg v krvi pogosto nizka, pri 20% bolnikov s hudo obliko in v 30% z malignim antigenom v krvi pa morda sploh ni mogoče zaznati. Pojav na tem ozadju pri bolnikih s protitelesi proti HBsAg velja za neugoden diagnostični znak; ugotavlja se v malignih oblikah hepatitisa B.

V akutnem poteku hepatitisa B se koncentracija HBsAg v krvi postopoma zmanjšuje do popolnega izginotja tega antigena. HBsAg izgine pri večini bolnikov v 3 mesecih po nastanku akutne okužbe.

Zmanjšanje koncentracije HBsAg za več kot 50% do konca tretjega tedna akutnega obdobja praviloma kaže na zaključek procesa okužbe. Običajno se pri bolnikih z visoko koncentracijo HBsAg na višini bolezni odkrije v krvi več mesecev.
Pri bolnikih z nizko koncentracijo HBsAg izgine veliko prej (včasih nekaj dni po začetku bolezni). Na splošno je čas odkrivanja HBsAg od nekaj dni do 4-5 mesecev. Najdaljše obdobje odkrivanja HBsAg z gladkim potekom akutnega hepatitisa B ne presega 6 mesecev od začetka bolezni.

HBsAg je mogoče najti pri zdravih ljudeh praviloma v profilaktičnih ali nenamernih študijah. V takih primerih se pregledajo drugi markerji virusnega hepatitisa B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg in preučijo delovanje jeter.

V primeru negativnih rezultatov so potrebne ponavljajoče se študije na HBsAg.
Če se pri ponovljenih krvnih preiskavah, ki trajajo več kot 3 mesece, pokaže HBsAg, je ta bolnik razvrščen kot kronični bolnik z virusnim hepatitisom B.
Prisotnost HBsAg je zelo pogosta. Na svetu je več kot 300 milijonov prevoznikov, v naši državi pa je okoli 10 milijonov prevoznikov.
Prenehanje krvnega obtoka HBsAg in kasnejša serokonverzija (tvorba anti-HBs) vedno kaže na sanacijo telesa.

Krvni test za prisotnost HBsAg se uporablja za naslednje namene: t

za diagnozo akutnega hepatitisa B:

• inkubacijsko obdobje;
• akutna bolezen;
• predčasno okrevanje;
  

za diagnozo kroničnega virusnega hepatitisa B;

za bolezni:

• kronični hepatitis;
• ciroza jeter;

za odkrivanje in identifikacijo bolnikov v rizičnih skupinah: t

bolniki s pogostimi hemotransfuzijami;

bolniki s kronično odpovedjo ledvic;

bolniki z več hemodializo;

bolnikih z imunsko pomanjkljivostjo, vključno z AIDS-om.

Vrednotenje rezultatov raziskav

Rezultati študije so izraženi kvalitativno - pozitivno ali negativno. Negativni rezultat kaže odsotnost seruma HBsAg. Pozitiven rezultat - identifikacija HBsAg kaže na inkubacijo ali akutno obdobje akutnega virusnega hepatitisa B kot tudi pri kroničnem virusnem hepatitisu B.

Protitelesa proti jedrskemu antigenu virusa hepatitisa B JgG (anti-HBcAg JgG) t

Običajno je serumski anti-HBcAg odsoten v serumu.
Pri bolnikih z anti-HBcAg se JgG pojavi v akutnem obdobju virusnega hepatitisa B in traja vse življenje. Anti-HBcAg JgG je vodilni marker prenosa HBV.

Preskusi krvi za anti-HBcAg JgG se uporabljajo za diagnosticiranje:

kronični virusni hepatitis B v prisotnosti antigena HBs v serumu;

virusni hepatitis B.

Vrednotenje rezultatov raziskav

Rezultat študije je izražen kvalitativno - pozitivno ali negativno. Negativni rezultat kaže odsotnost serumskega anti-HBcAg JgG. Pozitiven rezultat - identifikacija anti-HBcAg JgG pomeni akutno okužbo, okrevanje ali predhodno prenesen virusni hepatitis B. t

Antigen virusa hepatitisa B "e" (HBeAg)

Običajno HBeAg v serumu ni prisoten.
HBeAg najdemo v serumu večine bolnikov z akutnim virusnim hepatitisom B. Ponavadi izgine v krvi pred antigenom HBs. Visoka raven HBeAg v prvih tednih bolezni ali njeno odkrivanje več kot 8 tednov daje razlog za sum kronične okužbe.

Ta antigen se pogosto odkrije pri kroničnem aktivnem hepatitisu virusne etiologije. Posebno zanimanje za definicijo HBeAg je dejstvo, da njegova detekcija označuje aktivno replikacijsko fazo infekcijskega procesa. Ugotovljeno je bilo, da visoke koncentracije HBeAg ustrezajo visoki aktivnosti DNA polimeraze in so značilne za aktivno replikacijo virusa.

Prisotnost HBeAg v krvi kaže na njeno visoko infektivnost, tj. prisotnost aktivne okužbe s hepatitisom B v telesu, ki se pregleduje, in se odkrije le v prisotnosti antigena HBs v krvi. Pri bolnikih s kroničnim aktivnim hepatitisom se protivirusna zdravila uporabljajo le takrat, ko se v krvi odkrije HBeAg. HBeAg - antigen - marker akutne faze in replikacije virusa hepatitisa B.

Za diagnosticiranje se uporablja krvni test za prisotnost antigena HBe:

inkubacijsko obdobje virusnega hepatitisa B;

prodromalno obdobje virusnega hepatitisa B;

akutno obdobje virusnega hepatitisa B;

kronični trajni virusni hepatitis B.

Vrednotenje rezultatov raziskav

Rezultat študije je izražen kvalitativno - pozitivno ali negativno. Negativni rezultat kaže odsotnost serumskega HBeAg. Pozitiven rezultat - odkrivanje HBeAg pomeni inkubacijo ali akutno obdobje akutnega virusnega hepatitisa B ali nadaljnjo replikacijo virusa in nalezljivost bolnika.

Protitelesa proti antigenu "e" virusa hepatitisa B (anti-HBeAg) t

Anti-HBeAg v serumu je navadno odsoten. Pojav protiteles proti HBeAg navadno kaže na intenzivno odstranitev virusa hepatitisa B iz telesa in manjšo okužbo bolnika.

Ta protitelesa se pojavijo v akutnem obdobju in trajajo do 5 let po okužbi. Pri kroničnem persistentnem hepatitisu se anti-HBeAg nahaja v krvi bolnika skupaj s HBsAg. Serokonverzija, tj. prehod HBeAg na anti-HBeAg, s kroničnim aktivnim hepatitisom, ki je pogosteje prognostično ugoden, vendar ista serokonverzija ne izboljša prognoze za hudo cirozno transformacijo jeter.

Krvne preiskave za prisotnost anti-HBeAg se uporabljajo v naslednjih primerih pri diagnozi virusnega hepatitisa B:

ugotavljanje začetne stopnje bolezni;

akutna okužba;

predčasno okrevanje;

okrevanje;

okrevanje v pozni fazi.

diagnozo nedavno prenesenega virusnega hepatitisa B;

diagnozo kroničnega trajnega virusnega hepatitisa B.

Vrednotenje rezultatov raziskav

Rezultat študije je izražen kvalitativno - pozitivno ali negativno. Negativni rezultat kaže na odsotnost protiteles proti HBeAg v serumu. Pozitiven rezultat je odkrivanje protiteles proti HBeAg, ki lahko kažejo na začetno fazo akutnega virusnega hepatitisa B, akutno obdobje okužbe, zgodnjo fazo okrevanja, okrevanje, pred kratkim prenesen virusni hepatitis B ali persistentni virusni hepatitis B. t

Kriteriji za prisotnost kroničnega hepatitisa B so:

odkrivanje ali periodično odkrivanje HBV DNA v krvi;

stalno ali periodično povečanje aktivnosti ALT / AST v krvi; t

morfoloških znakov kroničnega hepatitisa pri histološki preiskavi biopsije jeter.

Odkrivanje virusa hepatitisa B s PCR (kvalitativno)

Virus hepatitisa B v krvi običajno ni prisoten.
Kvalitativna določitev virusa hepatitisa B po metodi PCR v krvi omogoča potrditev prisotnosti virusa v telesu pacienta in s tem ugotavljanje etiologije bolezni.

Ta študija zagotavlja koristne informacije za diagnozo akutnega virusnega hepatitisa B v inkubacijski in zgodnji razvojni fazi bolezni, kadar bolnikovi glavni serološki označevalci v krvi niso prisotni. Serumska virusna DNA je odkrita pri 50% bolnikov v odsotnosti HBeAg. Analitična občutljivost metode PCR ni manjša od 80 virusnih delcev v 5 μl, zadnji vzorec DNK, specifičnost - 98%.

Ta metoda je pomembna za diagnosticiranje in spremljanje poteka kroničnega HBV. Približno 5-10% primerov ciroze in drugih kroničnih bolezni jeter povzroča kronični nosilec virusa hepatitisa B. Marker aktivnosti teh bolezni je prisotnost HBeAg in DNA virusa hepatitisa B v krvi.

Metoda PCR omogoča določitev DNK virusa hepatitisa B v krvi tako kvalitativno kot kvantitativno. Določen fragment v obeh primerih je edinstvena DNA sekvenca gena strukturnega proteina virusa hepatitisa B.

Odkrivanje DNA virusa hepatitisa B v biomaterialu z uporabo PCR je potrebno za:

reševanje vprašljivih rezultatov seroloških testov;

odkrivanje akutne faze bolezni v primerjavi s predhodno okužbo ali kontaktom;

nadzoruje učinkovitost protivirusnega zdravljenja.

Izginotje DNA hepatitisa B iz krvi je znak učinkovitosti zdravljenja

Odkrivanje virusa hepatitisa B s PCR (kvantitativno)

Ta metoda zagotavlja pomembne informacije o intenzivnosti razvoja bolezni, učinkovitosti zdravljenja in razvoju odpornosti na aktivne droge.
Za diagnozo virusnega hepatitisa s PCR v serumu uporabljamo testne sisteme, katerih občutljivost je 50-100 kopij v vzorcu, kar omogoča odkrivanje virusa pri koncentraciji 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopije / ml. PCR pri virusnem hepatitisu B je vsekakor potreben za presojanje virusne replikacije.

Serumska virusna DNA je odkrita pri 50% bolnikov v odsotnosti HBeAg. Krvni serum, limfociti in hepatobiopsija lahko služijo kot material za odkrivanje DNA virusa hepatitisa B.

• Ocena ravni viremije je naslednja:
• manj kot 2,10 ^ 5 kopij / ml (manj kot 2,10 ^ 5 ie / ml) - nizka viremija;
• od 2.10 ^ 5 kopij / ml (2.10 ^ 5 IU / ml) do 2.10 ^ 6 kopij / ml (8.10 ^ 5 IU / ml) - srednja viremija;
• več kot 2,10 ^ 6 kopij / ml - visoka viremija.

Obstaja povezava med izidom akutnega virusnega hepatitisa B in koncentracijo HBV DNA v krvi bolnika. Pri nizki stopnji viremije je proces kroničenja okužbe blizu ničle, s povprečjem pa je proces kroničen pri 25-30% bolnikov in z visoko stopnjo viremije akutni virusni hepatitis B najpogosteje postane kroničen.

Indikacije za zdravljenje kroničnega interferona alfa HBV je treba upoštevati kot prisotnost označevalcev aktivne virusne replikacije (odkrivanje HBV HBV, HBeAg in HBV DNA v krvnem serumu v zadnjih 6 mesecih).

Merila za ocenjevanje učinkovitosti zdravljenja so izginotje HBEAg in HBV DNA v krvi, ki ga običajno spremlja normalizacija ravni transaminaz in dolgotrajna remisija bolezni, HBV DNA izgine iz krvi do 5. meseca zdravljenja pri 80% bolnikov. Zmanjšanje ravni viremije za 85% ali več do tretjega dne od začetka zdravljenja v primerjavi z izhodiščem je hiter in dokaj natančen kriterij za napovedovanje učinkovitosti zdravljenja.

Analiza PCR za hepatitis B

DNA virus iz družine Hepadnaviridae je neposredni povzročitelj hepatitisa B. PCR analiza hepatitisa B omogoča, da se v krvi bolnika odkrije prisotnost okuženega DNA virusa. Rezultat pozitivnega tipa na HBV DNA kaže na prisotnost okužbe v krvi bolnika. Opozoriti je treba, da diagnoza s pomočjo analize PCR ne omogoča le ugotoviti prisotnost okužbe, ampak tudi njeno količinsko obremenitev in aktivnost. Ta metoda je zanesljiva, natančna in ponovljiva. Kvantificiranje HBV DNA z qPCR se lahko uporabi za spremljanje učinkovitosti zdravljenja s HBV in je koristno za razumevanje naravne zgodovine HBV na endemičnem območju.

Proces okužbe s hepatitisom B se pojavi v domačem ali spolnem stiku - preko neposrednega stika z okuženo kri. Po okužbi virus vstopi v jetrne celice, v katerih nadaljuje aktivno razmnoževanje. Skozi krvni obtok se patogene celice razširjajo po vsem telesu. Treba je omeniti, da so celice hepatitisa B zelo odporne na kisline in visoke temperature. Svoje škodljive lastnosti lahko vzdržuje šest mesecev.

Vrste PCR za hepatitis B

Do danes obstajajo dve vrsti diagnostike, ki se predpisujeta, če sumite na prisotnost virusa hepatitisa B: kvalitativni PCR (s 100% natančnostjo določite prisotnost virusa v krvi) in kvantitativno PCR (omogoča določitev stopnje virusne aktivnosti).

Visokokakovostni PCR je predpisan, če obstaja sum na okužbo s HBV ali če druge diagnostične metode niso dale jasnih rezultatov. Ta vrsta analize PCR je izjemno enostavna za dešifriranje: negativna (v krvi ni odkrit virus), pozitiven (virus odkrit v krvi). Glavna naloga kvalitativne analize je ugotoviti prisotnost okuženih celic v zgodnjih fazah bolezni. Če je bil virus diagnosticiran dva tedna po domnevni okužbi, bo učinkovitost zdravljenja veliko večja. Če je virus v krvi približno dva meseca, postane bolezen kronična, zato je ni mogoče popolnoma ozdraviti.

Če kvalitativna diagnoza potrdi prisotnost HBV v krvi, zdravnik predpiše kvantitativno analizo.

Kvantitativna analiza omogoča ugotavljanje aktivnosti razvoja virusa v telesu bolnika. Ta vrsta analize PCR je dodeljena:

• za določitev stopnje bolezni;
• spremljanje učinkovitosti uporabljene terapije;
• za določitev stopnje odpornosti virusa na določeno zdravilo;
• za izbiro zdravil.

Kvantitativni kazalci virusa v krvi se merijo v ie na mililiter ali DNA na mililiter.

Če zdravnik takoj določi kvantitativno diagnozo, ne da bi preveril kakovost, je hitrost 75 ie na mililiter. Če se odkrije manj mednarodnih enot, je posledica tega, da se HBV ne zazna, ko so številke nad normalno, da se ugotovi prisotnost virusnega hepatitisa B.

Interpretacija kvantitativne diagnoze

Naslednji kazalniki (v kopijah / mililitrih) veljajo za normo CRP pri hepatitisu B: manj kot 10 3 - neaktivni virus; od 10 4 do 10 5 - virus je navadno neaktiven; - aktivni virus; 10 7 - virus v visoki stopnji aktivnosti.

Na podlagi kvantitativnih kazalnikov lahko s 100% natančnostjo določimo obliko bolezni (nosilec, akutno ali kronično), reakcijo virusa na zdravljenje, potrebo po dodatni diagnostiki.

Kronična oblika hepatitisa B se ugotovi, če je aktivnost virusa 10 5 kopij na mililiter. Če je rezultat pod 10 5 kopij na mililiter, se diagnosticira nosilec.

V obdobju zdravljenja je treba redno (enkrat na tri mesece) ponavljati kvantitativno diagnostiko, da bi pravočasno upoštevali obdobje, ko virus razvije imunost na uporabljena zdravila in spremeni metodo. Če so bile vse študije izvedene pravilno in je bilo izbrano učinkovito zdravljenje, bo ponovna analiza (po treh dneh zdravljenja) pokazala zmanjšanje aktivnosti patogenih celic za vsaj osemdeset pet odstotkov.

Biopsija jeter se izvede samo v primeru, ko je šest mesecev zdravljenja pokazalo, da so ravni ALT dvakrat višje kot normalno, in PCR diagnostika kaže stopnje, nižje od 10 5 kopij na mililiter krvi.

Priprava na raziskavo

Za analizo je potrebna venska kri. Da bi dobili najbolj natančne rezultate, je treba pripraviti postopek: zavrniti jemanje hrane vsaj osem ur pred odvzemom krvi; za dva dni zavrne zdravljenje z drogami (zdravnika je nujno opozoriti na jemanje zdravil); pred dajanjem krvi morate preživeti dvajset minut v mirovanju; Dvanajst ur pred postopkom opustite športne vaje, alkoholne pijače, kajenje in uživanje maščobnih živil.

Pomembno je: če je diagnoza potrebna za otroka, mlajšega od petih mesecev, potem mora vsakih deset minut šestdeset minut pred postopkom odvzema krvi dati kozarec vrele vode.

Povzamemo

PCR analiza za hepatitis B je danes najbolj natančna metoda za diagnosticiranje virusa. Metoda omogoča določanje mutiranih in skritih oblik bolezni, diagnosticiranje bolezni v prvih dneh okužbe, torej izbiro najučinkovitejšega zdravljenja. Laboratorij primerja rezultate analize z normo in jih nato zaključi. Podatki se obdelajo v dveh tednih. Da bi dobili napotnico za analizo PCR, je treba stopiti v stik s hepatologom, specialistom za nalezljive bolezni ali virologom. Pomembno je vedeti, da čim prej pridete do zdravnika, hitreje bodo doseženi rezultati, zato bo zdravljenje učinkovitejše.

Razlaga PCR in biokemijska analiza hepatitisa

Hepatitis je vnetni proces v jetrih, ki je posledica uničenja njegovih celic s strupenimi snovmi. Dešifriranje analize za hepatitis omogoča objektivno presojo zdravstvenega stanja pacienta, ki trpi zaradi bolezni jeter. Zdravnik za nalezljive bolezni vam bo povedal, kako razumeti rezultate študije in predpisati nadaljnje zdravljenje. Pacient, ki je neodvisno preučil pridobljene podatke, pripravi določene sklepe, ki se ne ujemajo vedno z resničnostjo.

Virus hepatitisa B je vsebovan v serumu in posebne laboratorijske diagnostične metode omogočajo odkrivanje patogenskih antigenov in protiteles proti njemu.

Seznam testov na hepatitis

Diagnozo virusnega vnetja jeter potrjujejo posebne študije. Pred začetkom zdravljenja se pacient testira:

1. Bolnik zjutraj med 7.00 in 9.00 opravi raziskavo krvi. Bolnik naj se vzdrži jedi 12 ur. Kvantitativna analiza hepatitisa B določa prisotnost virusa in titer protiteles v serumu. Hkrati zdravnik predpiše študijo, ki identificira HBV DNA s PCR reakcijami.
2. Pri okuženih bolnikih se ugotovi prisotnost proteina Anti-HBc IgG in antigena HBsAg. Specifični imunoglobulin kaže na hitro povečanje koncentracije virusa hepatitisa v serumu bolnika. V primeru negativnega testa na zdravilo Anti-HBc se IgG izvede dodatna raziskava o prisotnosti drugih bolezni.
3. Pri preučevanju obdobja akutne bolezni določimo imunoglobuline HBeAg in Anti-HBc IgM. Vzpostavitev pravilne diagnoze je možna šele po odkritju virusne RNA - hepatitisa, kar potrjuje molekularno-biološka metoda.
4. PCR se pogosto uporablja za diagnozo bolezni jeter - kvantitativna metoda vam omogoča, da predpiše učinkovito zdravljenje hepatitisa.

Imunološka študija

Da bi ugotovili sposobnost pacienta, da se spopade z nevarnim virusom, diagnosticirajte raven odpornosti telesa. Zaradi celotnega kompleksa laboratorijskih študij so ugotovljeni kvantitativni in kvalitativni kazalci imunoloških dejavnikov - protitelesa proti hepatitisu B.

Protein HBsAg je površinski antigen, ki je sestavni del superkapsida (virusne ovojnice) patogena. Njegova glavna funkcija je sodelovanje v procesu adsorpcije virusa s strani zdravih jetrnih celic. HBsAg peptid je odporen na okoljske dejavnike - alkalije (Ph = 10), 2% raztopino kloramina in fenola.

Oznaka HBsAg je prisotna v serumu okužene osebe. Takoj po njegovi pojavnosti RNA ne samo prevaja svojo sintezo, ampak vsebuje tudi jedrne Ar delce prejšnjega markerja. To je dokaz razvoja aktivne faze hepatitisa.

Prisotnost HBeAg pri kroničnem bolniku kaže na začetek aktivne faze infekcijskega procesa.

Anti-HBc marker vsebuje 2 vrsti protiteles - IgG in IgM. To je protein specifičen za en antigen. Za akutno obliko bolezni je značilna prisotnost Anti-HBc in IgM. Njihova pozitivna vrednost kaže na prejšnjo bolezen jeter.

Kvantitativna analiza

Za določitev aktivnosti patogena predpišemo PCR analizo. Določa raven virusne obremenitve in možnosti, da bolnik okreva. Polimerazno verižno reakcijo izvedemo po koncu latentnega obdobja. V raziskovalnem procesu določimo ne le HBsAg, ampak tudi marker HBeAg.

Dekodiranje PCR analize za hepatitis omogoča določanje stopnje aktivnosti patološkega procesa in učinkovitosti kompleksne terapije.

Zdravnik ugotovi, kako občutljivo je telo bolnika na protivirusna zdravila in ali je mogoče sprejeti ukrepe za odpravo vzrokov kronične bolezni jeter. V tem primeru se poveča indeks transaminaze in indeks aktivnosti povzročitelja je večkrat višji od normalnega indeksa, koncentracija aminokislin pa je več kot 106 kopij DNA na ml.

Norma transaminaze v krvi ustreza vrednostim encimov AsAT in AlAT. Alanin aminotransferaza pri ženskah ne presega 32 U / l, pri moških pa 40 U / l. Koncentracija virusa za okužene ljudi v zgodnji starosti je 100.000 izvodov na ml.

V neaktivni fazi virusa in v primeru Anti-HBc je HBV DNA v območju 2000 IU / ml, število kopij pa ne presega 10.000.

Metoda molekularne hibridizacije

Odgovor ELISA na hepatitis določa vrsto antigena s protitelesi in encimi. Postopno raziskovanje je sprejemljivo, vendar lahko le strokovnjak, ki je prejel rezultate analize, pravočasno postavi pravilno diagnozo.

Markerji virusnega hepatitisa med imunskim testom so HBsAg, Anti-Hbcor IgM. Ob začetku bolezni so povišani: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg je 1,239, virusna DNA ni odkrita. Po zdravljenju je rezultat analize pokazal zmanjšanje vrednosti HBsAg na 1,07, HBeAg pa postane negativen. Virusna DNA je prisotna.

Če dobimo negativne vrednosti IgM, IgG, IgA, je treba ugotoviti, ali je bolezen odsotna ali je prišlo do popolnega okrevanja.

Pozitivna vrednost IgG označuje popolnoma oblikovano imunost. V tem primeru IgM ni zaznan. Pomembno je vedeti, da študija o hepatitisu kaže na visok IgM titer.

V akutnem obdobju bolezni se pojavijo negativne vrednosti IgG. Remisijo virusne bolezni spremlja negativni imunoglobulinski IgM. ELISA je relativno enostavna in varna za zdravje bolnika.

Biokemični test krvi

Študija seruma identificira patologijo v telesu, določa diagnozo, omogoča ocenjevanje delovanja jeter in pridobivanje informacij o presnovi. Biokemična analiza se izvede zjutraj. Za raziskave z uporabo snovi, pridobljenih iz venske krvi.

Pomembno je upoštevati pravila priprave za testiranje na hepatitis C - v tem primeru dekodiranje vseh kazalnikov ne bo popačeno. Skupni bilirubin je običajno 8,5–20,2 mmol / l, njegovo povečanje pa kaže na pojav bolezni jeter. Vrednosti AlAT in AsAT prav tako naraščajo v primeru hepatitisa B.

Pri zdravih bolnikih je albumin 35–55 g / l. Nizke koncentracije beljakovin v plazmi kažejo na virusno vnetje jeter.

Normalni indeks LDH je v razponu od 125 do 250 U / l, njegova rast pa pomeni deformacijo in uničenje celic obolelega organa. Indikator LDH (sorbitol dehidrogenaze) kaže na stanje jetrnega tkiva. Normalna vrednost je 0–1 U / l. Stopnja rasti je značilna sestavina akutnega poteka hepatitisa B ali njegovega prehoda v kronično fazo.

Protein GGG ima nizko aktivnost v krvni plazmi.

Njegovo rast opazimo pri vnetju jeter in traja dolgo časa. Norma - 25–49 U / l za moške, za ženske je indikator bistveno nižji - 15–32 U / l.

Dekodiranje znakov kroničnega hepatitisa B

Identifikacija označevalcev bolezni jeter je glavna naloga zdravnika, ki skuša preprečiti napake pri diagnozi. Pomembno je vedeti, da na rezultat analize vplivajo naslednji fiziološki dejavniki:

Tabela antigenov in njihovo dekodiranje bo omogočilo bolniku, da dobi predstavo o naravi bolezni.

Vrste PCR za hepatitis B in interpretacija rezultatov

Polimerna verižna reakcija je vrsta krvnega testa, ki lahko natančno zazna virus hepatitisa B. Značilnost metode je, da lahko pokaže HBV v zgodnjih fazah - mesec dni po okužbi, medtem ko se specifičen antigen zazna pri bolniku šele po 2 mesecih.. PCR lahko zazna ne samo normalen DNA virus, ampak tudi mutantne seve, ki jih nobena druga analiza ne more videti.

Pri dekodiranju PCR za hepatitis B se rezultati primerjajo s standardnimi vrednostmi. Na podlagi tega so sprejeti sklepi o prisotnosti bolezni (pozitivni rezultat), koncentraciji virusa (aktivnost) ali odsotnosti bolezni (negativen rezultat). Obdelava podatkov je 2 tedna.

Vrste PCR za virusni hepatitis B

Obstajata dve vrsti diagnostike, ki sta predpisani za hepatitis B. Visokokakovostna PCR omogoča natančnost 100%, ali je HBV v krvi ali ne. Kvantitativna PCR kaže aktivnost virusa, tj. Koliko HBV DNA vsebuje 1 ml krvi.

Visokokakovostni PCR in njegova razlaga

Krvni test za hepatitis B s PCR lahko zazna le prisotnost fragmentov DNA. Imenovan v primeru, ko bolnik sumi na HBV infekcijo (HBV) ali kadar druge diagnostične metode, na primer, serološki testi ne dajejo jasnega odgovora. Dekodiranje rezultatov pri kvalitativni analizi je zelo preprosto:

• negativen rezultat - brez virusa;
• pozitiven rezultat - odkrit virus.

Namen visokokakovostne PCR je potrditi ali zanikati prisotnost virusa hepatitisa B, prav tako pa tudi zgodnjo diagnozo. Če se HBV zazna v 1-2 tednih po okužbi, bo zdravljenje čim bolj učinkovito. Z aktivnim razvojem HBV 2 meseca in več postane bolezen kronična in je ni mogoče popolnoma ozdraviti.

V primeru, ko visoko kakovost PCR za hepatitis kaže na prisotnost virusa, je naslednji korak kvantitativna diagnostika.

Kvantitativna PCR

Za učinkovito zdravljenje ali vrednotenje rezultatov zdravljenja preprosto vedenje, da ima bolnik HBV, ni dovolj. Vrednost DNK virusa hepatitisa B je treba količinsko opredeliti v 1 ml krvi, tj. V virusni obremenitvi telesa. Ta vrsta PCR za hepatitis B se izvaja v naslednjih primerih: t

1. Pred predpisovanjem zdravila.
2. Za oceno učinkovitosti zdravljenja.
3. Za določitev razvoja virusne odpornosti na zdravilo.
4. Za določitev stopnje, na kateri se nahaja bolezen.

Merska enota za virus je mednarodna enota (ie / ml) ali število kopij DNA / ml, tj. Število fragmentov DNA na 1 ml krvi. Razmerje med obema enotama je odvisno od izbranega testnega sistema in se giblje od 2 do 7 kopij / ml v 1 ie / ml. Če sistem ni znan, se za pretvorbo uporabi povprečna vrednost:

1 ie / ml = 5 kopij / ml

Če se kvantitativna analiza izvede takoj, je mejna vrednost za diagnosticiranje bolezni 75 ie / ml. Če je rezultat višji od tega kazalnika, se postavi diagnoza HBV, spodaj - HBV ni zaznan.

Obdelava kvantitativne PCR

Pri hepatitisu B so naslednje vrednosti virusne obremenitve (viremije), kopije / ml, standardi PCR:

• 10 ^ 5 kopij / ml. Ko se z veliko virusno aktivnostjo pogosteje dvakrat v šestih mesecih zvišuje raven ALT, se takoj predpiše protivirusna terapija.

Da bi ugotovili, kako se bo DNK hepatitis obnašal v smislu kroničnosti, tj. Prehoda v kronično obliko iz akutnega, se uporabljajo tudi rezultati PCR diagnostike:

• HBV DNA 2 x 10 ^ 6 kopij / ml pomeni, da je pridobitev kronične oblike bolezni neizogibna.

Priprava na raziskavo

Za določitev prisotnosti HBV s PCR se odvzame kri iz vene. Postopek se vedno izvaja strogo na prazen želodec in najbolje je priti v laboratorij zjutraj, ko je naravni čas počitka od hrane 8 ur. Da bi bili rezultati pregleda pravilni, je treba vnaprej vedeti, kako se pripraviti za pravilno odhod v kliniko. Dodatni koraki so naslednji:

1. Zavrnitev maščobnih živil, kajenja, alkohola in športa 12 ur pred postopkom.
2. Počitek 20 minut neposredno pred darovanjem krvi.
3. Pred začetkom postopka je treba medicinsko sestro opozoriti na uporabljena zdravila.

Pozor! Če se diagnoza izvaja pri otroku, mlajšem od 5 let, potem je treba pol ure pred postopkom vsakih 10 minut popiti 1 kozarec vrele vode.

Povzamemo

Do sedaj je PCR diagnostika za odkrivanje hepatitisa B najbolj natančna metoda. Metoda vam omogoča, da vidite skrite in mutirane oblike bolezni, da prepoznate bolezen v prvih tednih po okužbi in zato izvedete učinkovito zdravljenje. Glede na situacijo se izvede kvalitativni ali kvantitativni PCR, ki je namenjen odkrivanju HBV in vzpostavitvi njegove aktivnosti. Za testiranje se morate obrniti na virologa, specialist za nalezljive bolezni ali hepatologa.

Bistvo analize PCR za hepatitis B in njene rezultate

Virusni hepatitis B se uspešno zdravi, če se pravočasno zazna in število protiteles in antigenov v krvi pacienta pravilno določi. S pomočjo encimskega imunskega testa za hepatitis je mogoče zaznati prisotnost virusnih označevalcev, vendar ne morejo določiti natančne stopnje procesa.

Za kvantitativno vrednotenje uporabimo PCR diagnostiko. S pomočjo testa je mogoče prešteti število markerjev, predvideti potek bolezni in verjetnost ozdravitve s pomočjo protivirusnih zdravil.

Glavna prednost študije je sposobnost zaznavanja tudi minimalnih koncentracij virusa, da se identificira patogen na stopnji vrste.

Diagnoza hepatitisa B

Virus hepatitisa B je zelo nalezljiv in odporen na zunanje vplive. V krvi bolnika ostane aktivna več tednov. Zato je vsaka oseba izpostavljena tveganju za okužbo, tudi če opazimo profilakso.

Za diagnosticiranje bolezni predpišejo naslednje študije:

Bistvo metode PCR

Ameriški kemik K.Mullis je prejel Nobelovo nagrado in njegova diagnostična metoda se še vedno uporablja.

Prednik metode PCR (verižna reakcija s polimerazo) velja za znanstvenika iz Norveške H. Kleppe. Najprej je začel izvajati ojačanje (obnovitev) DNK z uporabo kratke verige DNK, to je sintetične premaze (neke vrste kopijo).

Vendar pa znanstvenik svoje ideje ni uresničil. Podobne študije je naredil ameriški kemik K.Mullis, ki je leta 1993 prejel Nobelovo nagrado za svoj izum. Od takrat se PCR uporablja za ugotavljanje očetovstva, diagnosticiranje genetskih bolezni in odkrivanje virusov.

Bistvo reakcije je, da se s pomočjo encimov kopira določen kos DNK. Kopirate lahko samo območje, ki ustreza določenim parametrom, in če je v predstavljenem vzorcu. Za začetek reakcije se uporabljajo naslednje komponente:

1. Matrična DNA s kopiranim mestom.
2. Primeri so po strukturi podobni DNA.
3. Polimeraza, to je encim, ki sproži reakcijo. Biti mora termostabilen, to je odpornost na ekstremne temperature.
4. Raztopina z določenimi parametri, ki zagotavlja prehod reakcije.

Reakcija se izvaja v več fazah:

Za odkrivanje hepatitisa B se uporabljata dve vrsti reakcij: kvantitativna in kvalitativna.

Kvantitativna PCR

Kvantitativna metoda določa količino genoma HBV

Kvantitativna PCR vključuje istočasno ustvarjanje kopij fragmentov DNA in določanje števila molekul. Meritev se izvede po vsaki fazi, to je v realnem času. To se doseže z uporabo fluorescenčnih sond, ki so vključene v verigo molekul in žarijo v določenem obdobju študije.

Ta metoda se uporablja za odkrivanje fragmentov DNA, ki so markerji virusa hepatitisa. Z uporabo kvantitativne metode je mogoče natančno izolirati genotip virusa. Z drugimi besedami, izračunamo število kopij genoma HBV na številko celice bolnika.

Kvantitativna analiza daje odgovore na naslednja vprašanja:

1. S kakšno intenzivnostjo bolezen napreduje.
2. Kako učinkovito je zdravljenje.
3. Ali se je razvila odpornost na zdravila?

Za diagnozo kronične stopnje okužbe je potrebna tudi kvantitativna meritev. Če je količina DNK pod 100 kosov / ml pri normalni ravni transaminaze, je oseba nosilec virusa.

V akutni fazi je količina protiteles veliko večja, pri protivirusnem zdravljenju pa povečanje števila protiteles kaže na razvoj odpornosti na zdravilo, kar je signal za prilagoditev zdravljenja.

Visoka kakovost PCR

Visokokakovostni PCR daje manj informacij, vendar lahko odpravi okužbo.

Visokokakovostna PCR lahko samo ugotovi prisotnost patogena v krvi. Če so odsotni, bolnik ni okužen, če patogen vstopi v kri, bo rezultat pozitiven.

Vendar pa je s pomočjo kvalitativne reakcije nemogoče pojasniti genom virusa, stopnjo bolezni. Zato je za diagnozo HBV izvedeno tako kvantitativno kot kvalitativno merjenje.

Priprava na raziskavo

Za analizo PCR je potrebna venska kri. To je treba storiti zjutraj na prazen želodec.

Bolnik se mora ustrezno pripraviti na študijo:

1. 10 ur, da zavržete hrano, lahko pijete samo čisto vodo.
2. Na predvečer prenehanja jemanja alkohola, za 4 ure, da ne kadijo.
3. Pred pregledom se je treba izogibati fizičnemu in čustvenemu stresu.
4. Prenehajte uporabljati zdravila 2 dni, če to ni mogoče, je treba obvestiti laboratorijskega tehnika. Nekatera zdravila vplivajo na končni rezultat.

Interpretacija podatkov

Pri kvantitativni reakciji se dobljeni kazalniki ovrednotijo ​​glede na število kopij DNA.

Podatke o meritvah kakovosti je lahko razumeti. On daje bodisi pozitiven ali negativen odgovor.

Pri kvantitativni reakciji lahko dobljene kazalnike ocenimo glede na število kopij DNA. Merska enota je kopija / ml.

Podatki se dekodirajo na naslednji način:

1. Če je količina HBV DNA manjša od 90, potem okužbe ni. Bolnik se je razvil po cepljenju ali pa je bil ozdravljen.
2. Ko število izvodov 2x100 govori o nosilcu virusa.
3. Število 2x106 označuje kronično fazo bolezni.
4. Pri DNK več kot 2x109 ima bolnik akutno hepatitis.

Napačni rezultati

Prednosti diagnostične metode z uporabo polimeraznih reakcij so naslednje: t

1. Neposredno odkrivanje patogenov. Nasprotno pa ELISA zagotavlja informacije o prisotnosti protiteles proti virusu.
2. Specifičnost. To pomeni, da je regija DNA, ki je prisotna v vzorcu biomateriala, ki se kopira.
3. Preobčutljivost. Metoda lahko celo zazna fragmente posameznih celic.
4. Diagnoza bolezni v akutni in latentni fazi. To pomeni, da je možno diagnosticirati bolezen na stopnji predkliničnih manifestacij.

Metoda ima pomanjkljivosti, ki vodijo do napačnih rezultatov. Najpomembnejša pomanjkljivost je verjetnost kontaminacije materiala. Glavni vir kontaminacije so slabo obdelane epruvete, laboratorijske roke, reagenti.

Del DNK iz prejšnje reakcije lahko vstopi v kri. Zato so za laboratorije uvedene večje sanitarne zahteve: ločeni prostori, plastične cevi, ultravijolična obdelava laboratorijev itd.

Lažno negativni rezultati so lahko posledica zmanjšane občutljivosti reakcije. To se zgodi v naslednjih primerih:

• pacient jemlje zdravila, npr. antikoagulante;
• oseba je pred analizo utrpela fizični stres (športne aktivnosti, trdo delo);
• v zadnjem času.

Če ima bolnik veliko verjetnost okužbe in je rezultat študije negativen, ga je treba ponovno pregledati.

Glejte tudi:

Zaključek

Metoda polimerazne verižne reakcije je glavna in najbolj informativna za diagnozo HBV. Omogoča ne le ugotavljanje statusa nosilca okužbe, ampak tudi pojasnitev stopnje bolezni, ovrednotenje rezultatov zdravljenja.

Za natančnejšo diagnozo se uporabi kvalitativna in kvantitativna meritev. Slabosti metode so verjetnost kontaminacije, zmanjšana občutljivost in precej visoka cena.

Da bi bili rezultati najbolj zanesljivi, je treba ustrezno pripraviti na študijo in jo izvajati v kliniki z ustrezno licenco in dobrim ugledom.

DNA hepatitisa B in PCR

DNK testi in PCR virusa hepatitisa B so najobčutljivejši testi, ki odkrivajo sledove molekulske DNA v jetrih, ki identificirajo prisotnost virusa. Bistvo metode je večkratno kopiranje fragmenta DNA, ki pripada povzročitelju bolezni.

PCR tipa hepatitisa B je verižna reakcija polimeraze zunanjega kemičnega reagenta z biološkim materialom, ki je predmet preiskave, namenjen identifikaciji virusnih molekul DNK v krvi in ​​njihovih kvantitativnih kazalcev na volumen enote. Analiza je dodeljena v naslednjih primerih:

• če se pri bolniku pojavijo znaki hepatitisa B;
• med diagnostičnimi dejavnostmi za mešani hepatitis;
• pojasniti učinkovitost zdravljenja.

Za analizo PCR zberemo vensko kri. Pred začetkom študije ne smete jesti približno 8 ur.

Običajni rezultat pri odkrivanju DNK v virusu se šteje za „nezaznan“. To pomeni, da je virus odsoten v krvi ali je njegova vsebina zanemarljiva. Končno diagnozo lahko izvede le specialist na podlagi celovite biokemične in imunološke analize krvne plazme za hepatitis tipa B. Zdravnik predpiše potek zdravljenja. Samozdravljenje vključuje preveč tveganja.

Vzorčenje venske krvi poteka za PCR analizo.

Metoda PCR omogoča odkrivanje DNA patogena tudi z minimalno prisotnostjo v izbranem vzorcu krvi. Poleg tega analiza omogoča odkrivanje antigenov, ki so že bili razviti za virus. Vsak od antigenov označuje določeno stopnjo bolezni:

• HBsAg - virus je trenutno prisoten.
• Anti-HBcor - patogen trenutno ni, vendar je bilo v preteklosti.
• Anti-HBs - v krvi so protitelesa proti hepatitisu B (kot opcija - herpes, HIV, klamidija, mikoplazmoza, kandidiaza, tuberkuloza, klopni encefalitis in mnoge druge bolezni).

Patologija in njeni znaki

Hepatitis B ali HBV je virusna okužba, ki prizadene jetrne celice. Nevarno je ne le z neposrednim delovanjem na parenhimski organ, kar slabi pregradno funkcijo in splošno odpornost. Bolj resne posledice so možne, kot so ciroza jeter in pojav malignih novotvorb.

HBV se prenaša s krvjo osebe, ki je okužena s hepatitisom, njegovim iztrebkom, skozi stik s sluznico, zlasti med spolnim odnosom, kožnimi lezijami, z nesterilnimi brizgami med transfuzijo krvi ali med trebušnimi operacijami. Novorojenček je lahko okužen s svojo bolno mamo, ko se dotika razpok v bradavicah.

Za hepatitis B so značilni naslednji simptomi: t

Nenavadna utrujenost

• povečanje utrujenosti pri nizkih obremenitvah;
• nenavadna utrujenost;
• težo v desnem hipohondriju;
• zmanjšan apetit, slabost;
• rumenkost kože, brazgotine oči;
• svetlo blato;
• temen urin;
• bolečine v sklepih.

Inkubacijsko obdobje, po katerem se začnejo pojavljati ti simptomi, je od enega do šestih mesecev. To je obdobje kopičenja virusnih celic v jetrnem krvnem obtoku. Ko njihova koncentracija doseže kritično maso, se virus prebije skozi membrane hepatocitov in se še naprej razmnožuje v celicah. Posledica tega je, da jetrne celice umrejo, razvije se ciroza, ki v odsotnosti ustreznih terapevtskih ukrepov povzroči, da je bolnik usoden. Pravočasen krvni test za PCR in DNK hepatitisa B pomaga izogniti se negativnim.

Indikacije za PCR so:

• test pozitivne DNK, ki potrjuje diagnozo hepatitisa B;
• akutni in kronični hepatitis;
• mešani hepatitis;
• kvantitativno določanje virusa v krvnem serumu;
• razvoj taktike učinkovite terapije.

Priprava na analizo

Priprava na diagnozo z uporabo PCR je določena z vrsto biomateriala. Torej kri in urin dajeta le zjutraj na prazen želodec. Tudi z urogenitalnega področja se jemljejo madeži in prask. Edina omejitev za ženske je menstruacija. Seks je za oba spola omejen na predvečer raziskovanja.

Rezultati PCR se lahko štejejo za zanesljive le, če je bolnik ustrezno pripravljen na postopek. Ta študija vključuje naslednje pogoje:

• poln duhovnega udobja, odsotnost navdušenja. Da bi zagotovili, da se ta analiza prenese tudi doma. Potrebno je le poklicati zdravnika z ustrezno opremo;
• vzdrževanje hrane, alkohola, kajenja, telesne dejavnosti vsaj 8 do 12 ur pred analizo, sicer bodo podatki o raziskavah izkrivljeni;
• 15-20 minut popolne sprostitve pred zbiranjem krvi;
• prekinitev zdravil (če to ni mogoče, je treba opozoriti na laboratorij);
• otrokom, mlajšim od pet let, pol ure pred analizo je treba piti v vreli vodi v majhnih količinah.

Kako je študija

Analiza PCR temelji na načelih, ki jih uporablja molekularna biologija. Sestavljeni so iz uporabe posebnih encimov, ki cepijo in replicirajo dele DNK in RNA infekcijskega povzročitelja, ki se nahaja v krvi. Po tej operaciji dobljene vzorce identificira baza podatkov, ki je na voljo v laboratoriju. Hkrati se ugotovi vrsta okužbe in koncentracija patogena v krvi.

Za študijo se uporablja ojačevalnik - termostat, ki je sposoben ogrevanja in hlajenja cevi z biomaterialom. To je potrebno za aktiviranje replikacijskih procesov. Natančnost analize je odvisna od natančnosti temperaturnih parametrov.

Rezultati dekodiranja

Pozitivni rezultat za bolnika je zaključek laboratorija „ni odkrit“. To pomeni odsotnost DNK hepatitisa B v krvi, kar je v številčnem smislu približno 120 ie / ml ali 200 kopij na isto enoto volumna krvi. Ta vrednost je norma. Zahteva za biološki material je, da ne sme biti kontaminirana.

Dekodiranje drugih rezultatov analize omogoča naslednje diagnoze:

• Koncentracija DNA hepatitisa B v krvi je več kot 200 kopij, vendar pod kritično stopnjo. Huda patologija ni prisotna.
• Viremija v blagi obliki, do 500 kopij na ml. Izbira zdravljenja je odvisna od kazalcev biopsije jeter in stopnje poslabšanja njenih funkcij.
• Povečana koncentracija virusa (več kot 500 kopij / ml). Vnetni proces v aktivni fazi in zahteva intenzivno protivirusno terapijo.
• Največja virusna obremenitev (več kot 800 kopij na ml). Terapevtski ukrepi so razviti na podlagi bolnikovega stanja in so v celoti usmerjeni v največjo možno izboljšanje.

Za bolnika je dober rezultat zaključek "ni zaznan"

Določanje kvantitativnih kazalcev vsebnosti DNA v hepatitisu B med PCR je osnova za izbiro terapevtskega poteka. Po treh ali šestih mesecih znova opravimo teste za preverjanje učinkovitosti protivirusnega zdravljenja.

Funkcija verižne reakcije s polimerazo

V metodi PCR uporabljamo dva pristopa za določanje DNK, ki pripadata virusu: kvalitativna in kvantitativna.

Kvalitativni pristop potrjuje ali zanika prisotnost hepatitisa B. PCR je predpisan na zahtevo pacienta, ki sumi, da je okužen s HBV infekcijo ali v primeru, ko zgodnja diagnoza ne da nobenega drugega nedvoumnega rezultata.

Če se virus hepatitisa B lahko odkrije najkasneje dva tedna po vstopu v telo, je najverjetneje pozitivna prognoza za zdravljenje. V prihodnosti se bo bolezen začela razvijati. Po približno dveh mesecih bo vstopila v kronično fazo. Popolno zdravljenje v tem primeru bo postalo nemogoče.

Kvantitativni pristop k PCR se uporablja le, če se odkrije virus. Ocenjuje:

• specifična virusna obremenitev jeter;
• intenzivnost napredovanja bolezni;
• odpornost proti protivirusnim zdravilom;
• učinkovitosti zdravljenja.

Ti kazalniki so neposredno praktični. Še posebej kvantitativni kazalnik DNA. Prognoza v akutni fazi hepatitisa B je odvisna od koncentracije virusa v krvnem obtoku jeter, zato nizka koncentracija virusnih celic skoraj popolnoma izključuje prehod akutnega na kronični hepatitis. Takšni bolniki ne predstavljajo nevarnosti za druge. Visoka virusna obremenitev prispeva k kroničenju patološkega procesa in možnosti okužbe s hepatitisom pri ljudeh, ki so v stiku s pacientom.

Obstaja tudi povezava med koncentracijo virusnih genov v krvi in ​​cirozno degeneracijo jeter ter pojavom raka njegovega parenhima.

PCR testi pomagajo zdravniku odkriti nosilce virusa.

Učinkovitost protivirusnega zdravljenja je določena s stopnjo zmanjšanja koncentracije DNA hepatitisa B v jetrnem obtoku. Zadosten rezultat je zmanjšanje virusne obremenitve za 1-2 krat z intenzivnim zdravljenjem od treh mesecev do šestih mesecev. Nižje stopnje zahtevajo spremembo zdravljenja.

Napoved razvoja patologije in imenovanje ustrezne terapije izhaja iz:

• količinski volumen DNA jetrnega virusa v krvnem serumu;
• sorodni biokemični parametri (npr. raven levkocitov v krvi in ​​vsebnosti bilirubina);
• označevalci virusne infekcije;
• rezultati biopsije jeter.

PCR za splošni namen

Analiza s pomočjo polimerazne verižne reakcije pomaga zdravniku:

• odkrivanje nosilcev virusa;
• napovedati razvoj hepatitisa tipa B;
• poskrbite, da bo bolezen postala kronična;
• spremlja aktivnost virusa v vseh fazah razvoja;
• identificirati mutirane in skrite seve hepatitisa B;
• oceni učinkovitost zdravljenja virusa pri izbiri določene taktike in jo spremeni v primeru nezadostnega uspeha.

Prednosti metode

Za razliko od drugih testov, ki se uporabljajo za diagnosticiranje hepatitisa B, ima PCR:

PCR analiza je zelo občutljiva.

1. Izjemna občutljivost. Tehnika omogoča raziskovalcu, da odkrije povzročitelja bolezni, čeprav je koncentracija njegovih molekul DNK v krvi minimalna. To vam omogoča, da sprejmete preventivne in kurativne ukrepe v zgodnji fazi bolezni, ko očitno še ni izražena nobenih simptomov.
2. Široka pokritost priložnosti. PCR lahko zazna ne samo povzročitelja virusnega hepatitisa B, ampak tudi številne druge bolezni.
3. Univerzalnost pristopov. Biomaterial za raziskave so lahko kri, slina, sluznice in koža.
4. Učinkovitost. Zaključek bo pripravljen natanko en dan po odvzemu krvi (rezultat analize je dobljen najkasneje 7 ur).
5. Verodostojnost. V vseh pogojih metode PCR nikoli ne kaže napačnih podatkov.
6. Študija dostopnosti cen. Po cenah je PCR le malo višji od običajnih testov, ki uporabljajo krvne snovi kot biomaterial.

Edini strošek raziskave je njegova tehnološka kompleksnost. Za kakovostno izvedbo PCR potrebujemo izjemno čisto biomaterial, sodobno opremo in dobro usposobljeno osebje. Priporočljivo je, da se za diagnosticiranje, ki uporablja to metodo, zaprosi specializirane laboratorije.

Virusni hepatitis B se nanaša na bolezni, katerih popolno zdravljenje je mogoče le v najzgodnejših fazah razvoja. Identificiranje bolezni v tej fazi pomaga pri preobčutljivi diagnozi s PCR. Prvi simptomi, ki povzročajo sum poškodb jeter zaradi virusa, morajo biti razlog za posvetovanje s strokovnjakom. Če se diagnoza potrdi, je treba zdravljenje začeti takoj. To bo izboljšalo prognozo in povečalo verjetnost podpore jeter v zdravem stanju že več let.