PCR diagnostika za hepatitis C

Hepatitis C je vnetje jetrnih celic, ki nastane kot posledica okužbe z virusom HCV (hepatitis C) v stiku s krvjo okužene osebe. Genetsko kodo flavivirusa HCV prenaša molekula RNA (ribonuclenske kisline), ki jo vsebuje struktura virusa. Ta življenjsko nevarni pojav odlikuje tajnost na začetni stopnji patologije. Časovni interval med okužbo in pojavom simptomov (odziv imunskega sistema) je lahko od enega meseca do šestih mesecev. Bolezen praviloma ima kronično obliko in jo je težko zdraviti.

Sodobna medicina vam omogoča diagnozo patologije z manjšo poškodbo jeter. Najpogostejše in učinkovitejše diagnostične metode vključujejo analizo PCR. Razmislite v tem članku, kaj je in kakšne vrste obstaja.

Kaj je študija

Analiza PCR za hepatitis C je laboratorijska preiskava, ki zazna flavirus, genetski material ribonuklelenske kisline (RNA). Določa število molekul RNA v krvi, kakovost biološkega materiala, genetski tip flaviv HCV.

Metoda PCR za hepatitis C omogoča odkrivanje minimalne količine flavirusa pred nastankom protiteles, praviloma kmalu po okužbi.

Študija se pogosto imenuje RNA analiza, saj zazna delce ribonukleinske kisline z velikostjo 30-60 nm, ki jih vsebuje flavavirus.

Študija poteka na naslednji način: na prazen želodec pacient daje kri iz vene, ki se nato testira z različnimi metodami:

• PCR v realnem času se izvaja na zaprt avtomatiziran način in ima spodnjo mejo za detekcijo RNA virusa, enako 15 IU / ml;
• COBAS AMPLICOR z občutljivostjo 50-100 IU / ml.

Višja kot je prag občutljivosti diagnostične tehnike, večje so možnosti najti najnižjo vsebnost virusa v biološkem materialu, ki se preiskuje.

Katere vrste analiz se uporabljajo

Analiza, ki se že več desetletij uspešno uporablja, se imenuje PCR hepatitis, ki jo je mogoče zlahka in hitro odkriti. V medicini obstajata dve metodi reakcije, ki se bistveno razlikujeta:

• kvalitativna metoda razkriva prisotnost genskega vira specifičnega virusa v biološkem materialu;
• kvantitativna analiza meri število genetskih snovi, kar omogoča določitev stopnje patologije ali oceno učinkovitosti terapevtskega poteka;
• genotipizacija določa vrsto virusa v telesu.

Na splošno krvni test pomaga ugotoviti naravo viremije in genetski tip patogena. Raziskave praviloma potekajo enkrat, odvisno od stopnje občutljivosti diagnostičnega sistema. Po potrebi se ponovno testiranje izvede z uporabo ultra občutljivega reagenta.

Visoka kakovost PCR

Kaj je visokokakovostna PCR RNA za hepatitis C? Bistvo reakcije je prisotnost sekvence hepatitis RNA in reakcija je mogoča le v prisotnosti virusnih proteinov podobne etimologije v testu ELISA. V postopku primerjave so ugotovljene obremenitve in morebitne poškodbe jetrnega območja.

Posebnost te metode je sposobnost zaznavanja celo prisotnosti ločenega gena.

Opozoriti je treba, da bolnik po prejemu rezultatov testov PCR in ELISA potrebuje ustrezno zdravljenje, ne glede na to, kakšen je bil končni rezultat imunskega odziva. Pozitivno kaže na okužbo, PCR negativno pa na zmanjšano število virusnih delcev glede na stopnjo občutljivosti.

Obstaja več pogojev, ki vplivajo na proizvodnjo negativnega PCR in ELISA:

• pomanjkanje ustreznih pogojev za zbiranje materiala;
• rezultat analize je kontaminacija;
• v primeru zgodnjega injiciranja heparina bolniku.

Bolniku ni treba upoštevati določenih pravil za vzorčenje krvi za analizo PCR, v tem primeru je kakovost te analize odvisna od zdravnika, ki izvaja postopek. Sposobnost ugotavljanja prisotnosti bolezni (zlasti v akutni obliki) se pojavi v nekaj tednih po okužbi.

Kvantitativna analiza

Kvantitativni test se priporoča za odkrivanje virusne obremenitve tik pred nastankom nadaljnjega zdravljenja in reakcije telesa. Proces vzorčenja krvi se izvaja na podoben način kot pri visokokakovostni PCR in ELISA, edini pogoj je odsotnost možnosti kajenja bolnika pred postopkom.

Glede na značilnosti, pridobljene pri študiji podatkov, je povečana obremenitev značilna kazalniki od 800000 ie / ml, nizka - 400000 ie / ml. Prisotnost virusa v telesu bolnika je pokazana s PCR za hepatitis, ni negativni kvalitativni test.

S tovrstnimi raziskavami lahko ugotovimo, kako nevarna je bolnik do ljudi okoli sebe. Na primer, ugotavljanje visoke ravni kaže povečano infektivnost bolnika. Poleg tega rezultati analize pomagajo oblikovati nadaljnje najučinkovitejše zdravljenje in določijo, koliko je obstoječa terapija učinkovita.

Hitri negativni odziv testov kaže na uspeh izbrane tehnike, počasna pa na potrebo po prilagoditvah in uporabi večstranske obdelave.

Postopek odvzema analitskega postopka je odvisen od določenega dneva poteka bolezni. Prva določitev se izvede prvi dan po sprejemu bolnika v bolnišnico, nato pa se postopek ponovi po 4, 12 in 24 tednih po jemanju zdravil.

Tako kvantitativna analiza pokaže, katero zdravljenje je najbolj učinkovito, trajanje razpoložljive terapije in pacientova nevarnost v odnosu do drugih ljudi.

Genotipizacija

Pri preučevanju materialne analize je pomembno določiti točnost genotipa virusa. Trenutno obstaja 11 vrst virusa hepatitisa C, ki vključujejo nekatere podvrste.

Vse te vrste se različno odzivajo na različna zdravljenja, pri čemer so posamezne sorte popolnoma odporne na številne droge.

Genotip omogoča ugotavljanje in prikazovanje stanja jeter. Ni redko, da se rezultati v rezultatih „ne tipizirajo“, kar pomeni, da ta testni sistem ne zazna virusa v krvi pacienta. To se lahko odkrije, če se določen genotip ne ujema s tem območjem. V takem primeru se analiza vzame večkrat in za preučevanje gradiva se uporablja bolj občutljiv sistem.

Ultra občutljiva metoda

Ultrasenzitivna metoda je potrebna v nekaterih primerih, ko diagnoze hepatitisa ni mogoče izvesti z drugimi metodami, in kdaj je treba analizo določiti lečeči zdravnik:

• če sumite na prisotnost virusa hepatitisa C pri bolnikih s skrito vrsto bolezni;
• prisotnost protiteles proti virusu hepatitisa C, ki ni potrjena z diagnostiko PCR;
• za določitev kakovosti učinkovitosti izbrane metode zdravljenja in potrditev odprave bolezni.

Občutljivost te metode je precej višja od tiste, ki se običajno uporablja, vendar ta metoda ne izključuje pridobitve napačnih rezultatov, tako pozitivnih kot negativnih. V takih razmerah je pomembno nadzorovati kakovost postopka in možnost kontaminacije samega materiala.

Razlaga analize PCR

Dekodiranje analize se izvede na podlagi predstavljenih materialov, medtem ko rezultati laboratorijskih raziskav vsebujejo nekatere zgoraj opisane podatke.

Transkript lahko vključuje pozitivno PCR-polimerazno verižno reakcijo in negativno ELISA test, kar pomeni, da bolnik v krvi nima znakov hepatitisa C, v preteklosti pa je prenesel akutno obliko bolezni. Praviloma se pri diagnosticiranju strokovnjaki zatekajo k uporabi PCR testnih indikatorjev.

Če povzamemo vse zgoraj navedeno, lahko sklepamo, da je pri analizi pomembno upoštevati vsa pravila in priporočila, da so dobljeni rezultati čim bolj točni, na podlagi pridobljenih podatkov pa je mogoče ugotoviti učinkovitost uporabljene terapije in nadaljnjo možnost popolnega okrevanja.

Kvalitativna analiza za hepatitis C

8. marec 2017, 12:29 Strokovni članki: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10,547

Kvalitativna analiza verižne reakcije s polimerazo - PCR za hepatitis C določa prisotnost ali odsotnost HCV v telesu. V laboratorijskih pogojih je raziskana struktura RNA, ki bo vključevala virus. V primeru odkritja virusa C je treba opraviti postopek zdravljenja, saj bo zapostavljeno stanje jeter povzročilo hude posledice. Po obnovitvi se izvede visokokakovostna PCR, da se potrdi odsotnost protiteles. Imenovan in za redne preglede. Z nizko koncentracijo povzročitelja v krvi PCR (kvalitativna) morda ne zazna ničesar, ker ima diagnostični sistem lastne pragove občutljivosti. V primeru začetne stopnje bolezni ali blage oblike, PCR opravimo z ultradiagnostiko na ultra občutljivi opremi.

Kaj je RNA virus?

Izraz RNA virusa hepatitisa C (ali RNA virusa hepatitisa C) je sama bolezen jeter. Virus C se veže na zdravo celico telesa s penetracijo v notranjost. Sčasoma, razpršeno po telesu, je potrebno le priti v kri. Posledica tega je, da patogen prodre skozi jetra, se združi s celicami in trdo dela. Jetrne celice (hepatociti) delujejo pod njenim vplivom, se spreminjajo in s tem umirajo. Daljši je virus C v jetrih, večje je število celic. Sčasoma se razvijejo nevarne bolezni, ki vodijo v maligno degeneracijo in smrt.

Okužba jeter s to vrsto virusa se morda ne bo pojavila navzven. Že dolga leta ali desetletja se okužena oseba počuti popolnoma zdravo in le naključna preiskava najpogosteje razkriva patologijo. Pri dajanju krvi za hepatitis se preuči del verige RNA (ribonukleinske kisline), ki je del človeškega gena (DNA). Rezultati laboratorijskih preiskav se ne smejo uporabljati za samozdravljenje, ker je to le indikator. Natančno sliko in nadaljnjo diagnozo bolje določi zdravnik.

Ko končamo: indikacije za raziskave

V potrditev HCV se opravi PCR analiza (verižna reakcija s polimerazo). Študije PCR pomagajo najti povzročitelja v strukturi RNA in predpisujejo učinkovito zdravljenje. Imenovan v naslednjih primerih: t

• odkrivanje znakov vnetja jeter;
• presejalne študije za preprečevanje;
• pregled oseb v stiku;
• diagnozo hepatitisa mešanega izvora (določitev glavnega patogena);
• določanje stopnje reprodukcijske aktivnosti virusa v kronični obliki;
• ciroza jeter;
• za določitev učinkovitosti predpisanega zdravljenja.

Raziskave PCR predpisuje zdravnika, da določi učinkovitost poteka zdravljenja hepatitisa.

Obstaja kvalitativna in kvantitativna analiza PCR. Kvantitativna PCR prikazuje odstotek RNA z virusnimi nosilci v krvi in ​​kvalitativno kaže na prisotnost ali odsotnost virusa. Pozitiven kazalnik kakovosti (prisotnost RNA hepatitisa C) potrebuje tudi kvantitativno raziskovanje. Visoka koncentracija povzročitelja hepatitisa C je povezana s tveganjem prenosa, to je okužbo drugih. Nizke številke so boljše za zdravljenje. Količina RNA virusov v krvi ni povezana z intenzivnostjo bolezni. Analiza PCR poteka tudi v primeru interferonske terapije, da se predpiše trajanje in kompleksnost poteka zdravljenja.

Značilnosti visoko kakovostne PCR analize za hepatitis C

Kvalitativni analizi je dodeljen indikator verižne reakcije s polimerazo za vse bolnike, ki imajo v krvi protitelesa proti hepatitisu C. Tisti, ki so bili bolni in so se ozdravili, morajo ponovno opraviti test. Priporočljivo je, da se opravi analiza za hepatitis B, nato v primeru pozitivnega zaključka in za hepatitis D. Tudi kvalitativno analizirane reakcije je treba izvesti skupaj z drugimi krvnimi preiskavami. Analize bodo pokazale popolno sliko širjenja virusa.

Iz rezultatov testov bo viden ali negativen le pozitiven test za hepatitis C, tj. Prisotnost ali odsotnost virusa. Če je izhod "zaznan", je virus še vedno aktiven. Oznaka "ni odkrita" pomeni odsotnost virusa ali njegovo majhno količino. Pri tem kazalniku je treba upoštevati, da je analitična občutljivost diagnostičnih sistemov drugačna in da je lahko hepatitis C RNA še vedno v krvi, vendar v analizi ni izražen.

Posebej občutljiva metoda PCR razkriva ultra hepatitis C tudi v skromnih količinah. Uporabljena je študija fluorescenčne hibridizacije, ki je večkrat višja od standardnih PCR sistemov. Metoda se uporablja v več primerih:

• domnevne skrite oblike hepatitisa C;
• PCR diagnostika ni potrdila patogena, vendar obstajajo protitelesa;
• v primeru izterjave;
• za odkrivanje zgodnje okužbe.

Nazaj na kazalo

Analiza dekodiranja

PCR dekodiranje HCV vpliva na končno odločitev pri diagnozi, zlasti z ultrametodno metodo. Glavna pomanjkljivost te študije je strogo upoštevanje sterilnih pogojev za vzorec in materiale. Rahlo odstopanje včasih kaže netočne analitične zaključke, otežuje diagnozo in poznejše zdravljenje. Analiza PCR za določanje hepatitisa RNA ne kaže vedno samozavestno sliko bolezni, včasih so dovoljene netočnosti in v obeh smereh.

Pri diagnosticiranju virusa hepatitisa je priporočljivo uporabiti celovit pregled.

Norma kazalnikov

Odsotnost JgM protiteles proti virusnemu hepatitisu C v rezultatih študije velja za normo pri analizi verižne reakcije s polimerazo. Istočasno ugotovitve serološke analize kažejo na prisotnost protiteles proti virusu C in to je tudi v normalnih mejah. Kvalitativna opredelitev ne kaže intenzivnosti bolezni, ampak samo razkriva povzročitelja hepatitisa C v RNA. Ta analiza se ponovi po obdelavi, da se potrdi dejanski izkoristek.

Odstopanja

Če so prisotna JgM protitelesa proti HCV RNA, to kaže na razvoj okužbe. Bolezen hkrati poteka akutno ali kronično, manifestira se v različnih fazah. Če se zabeleži zmanjšanje števila protiteles, bo analiza pokazala, da so bili rezultati zdravljenja doseženi med obnovo. V diagnostiki so zelo redki primeri lažno pozitivnih ugotovitev. Najdemo jih pri ženskah med nosečnostjo in pri ljudeh z drugimi nalezljivimi boleznimi.

Diagnoza s PCR za hepatitis C

Ni vsakdo ve, zakaj uporablja PCR diagnostično metodo za hepatitis C. Ena izmed najpogostejših skupin bolezni so nalezljive bolezni prebavil. Najpogosteje so prizadeti želodec (razjede), črevesje (kolitis, enteritis) in jetra (hepatitis).

Med vsemi zgoraj navedenimi organi je največje breme za jetra. V telesu je vloga jeter izjemno pomembna:

1. Skoraj vse presnovne reakcije se odvijajo v jetrih (kjer se oblikujejo vse vrste vitalnih komponent, ki omogočajo telesu popolno delovanje).
2. Jetra so glavni organ za razstrupljanje. Z njegovo pomočjo (zlasti preko žolča) se odstranijo številni substrati, ki lahko povzročijo zastrupitev in povzročijo resne posledice.

Na žalost veliko ljudi ne spremlja svojega zdravja, zato jetra začnejo trpeti. Običajno se razvijejo hepatitisi različnih etiologij (virusni, toksični).

Opredelitev hepatitisa

Virusni hepatitis zavzema pomembno mesto med boleznimi jeter. Resnost poteka bolezni, zapletenost zdravljenja jih je postavila na prvo mesto med patologijo druge narave tega organa.

Vsi hepatitisi so razdeljeni na akutne in kronične. Hepatitis A in B sta razvrščeni kot akutni, pri kroničnem hepatitisu C pa na prvem mestu.

To bolezen povzroča virus hepatitisa C. Značilna značilnost je, da bolezen lahko traja dolgo časa brez kakršnih koli kliničnih manifestacij.

Prenaša se predvsem prek krvi. S pretokom krvi virus vstopi v jetra, kjer se začne razmnoževati v celicah. Zaradi kopičenja virionov pride do uničenja okuženega hepatocita. V odgovor na to se začnejo proizvajati protitelesa, ki začnejo napadati ostanke hepatocitov. Zaradi tega se skozi čas razvije bazen proti jetrnim celicam, kar poslabša potek bolezni.

Ker je bolezen blaga asimptomatska ali asimptomatska, klinični znaki pa se pojavijo le, ko so celice občutno prizadete, ta bolezen zahteva oblikovanje diagnostičnih metod za odkrivanje njene prisotnosti in ustrezne ukrepe.

Diagnoza hepatitisa C: kvalitativne in kvantitativne analize

Za diagnozo hepatitisa C se trenutno uporabljajo metode, kot so biopsija jeter in imunogram.

Omogočajo vam neposredno določitev prisotnosti okuženih hepatocitov (vzorca jetrne biopsije) ali specifičnih protiteles proti prizadetim celicam (imunogram). Vendar pa obstaja metoda, ki vam omogoča, da zanesljivo določite prisotnost samega virusa. To je verižna reakcija PCR-polimeraze.

Bistvo te metode je v tem, da se pod določenimi pogoji pojavi proizvodnja RNA verig. To je posledica dejstva, da so v krvi ali v zadevni biopsiji fragmenti virusnega delca. Pri povezovanju z nekaterimi molekulami v mediju pride do sinteze verig, ki so komplementarne virusni RNA. Pri njihovi kasnejši analizi in primerjanju z znano nukleotidno sekvenco virusa hepatitisa C je mogoče ugotoviti, ali je virus prisoten v telesu in ali je poškodba jeter prisotna.

PCR izvajamo po odkrivanju specifičnih protiteles proti virusu hepatitisa v krvi. Po opravljenem testu se rezultat - RNA »zazna« ali »ne zazna«. Občasno lahko reče „ni dovolj materiala“ - v tem primeru je potrebno ponovno testiranje za hepatitis C.

Če je število virusnih delcev manjše od zahtevanega minimalnega zneska, lahko rečemo, da hepatitisa ni, minimalne količine genskega materiala pa bi lahko bile „zmedene“ zaradi mimikrije genskega materiala ali nekaterih nukleotidnih sekvenc, ki bi lahko sovpadale z virusom.

1. Pri PCR-ju lahko opazimo negativen rezultat, kadar so v krvi dejansko prisotni virusni delci, vendar so tako majhni (v zadnjem času okužba ali pred analizo je potekala dolgoročna in intenzivna protivirusna terapija), da testni sistem preprosto ne more normalno določiti njihove koncentracije. RNA - "ni zaznana".
2. Če ima PCR pozitiven rezultat, potem je v krvi toliko virusnih delcev, da njihovo število presega spodnji prag občutljivosti testnega sistema. V tem primeru obstaja veliko tveganje za razvoj infekcijskega procesa (ali je že prisoten v precej napredni fazi). Običajno je visoka količina virusa že indikacija za zdravljenje in kasnejšo presaditev jeter.

Včasih lahko test postane lažno pozitiven ali lažno negativen.

V primeru, da so v reakcijskem mediju prisotne nekatere komponente, ki zavirajo tvorbo kopij virusnega delca, se opazi lažno negativen rezultat PCR hepatitisa. Zaradi tega ni mogoče dobiti prave slike o stanju krvi, ki prispeva k prehodu virusa in napredovanju bolezni. Prisotnost heparina v krvi lahko vpliva tudi na reakcijo (z zmanjšanjem relativne viskoznosti krvi). Napačna razlaga analize je mogoča tudi, če pogoji prevoza in skladiščenja materiala v preiskavi niso bili izpolnjeni.

Lažno pozitivni rezultati, ko je diagnosticiran hepatitis C, PCR najpogosteje nastane, ko je cev ali delovno okolje kontaminirano. Poleg tega lahko opazimo pozitivne rezultate s prisotnostjo virusov hepatitisa drugih skupin (zaradi navzkrižne reakcije).

Kvalitativna analiza PCR za odkrivanje hepatitisa C

Prisotnost velikega števila krioglobulinov v krvi prav tako neposredno vpliva na izvajanje PCR. Zaradi tega je nujno potrebno določiti njihovo koncentracijo v krvi pred testiranjem na hepatitis C, da bi vnaprej odkrili popačenje rezultata in ga preprečili.

Po teh testih postane jasno, ali so v krvi virusni delci. Pri njihovem določanju je priporočljivo takoj začeti z protivirusno terapijo, da bi upočasnili napredovanje procesa. Za razliko od hepatitisa B ni popolnega ozdravljenja za hepatitis C; bolezen preide v latentno stopnjo in začne počasneje. Poškodba jeter je neizogibna. V zadnji fazi procesa, ko jetra ne morejo več obvladati svoje funkcije, lahko zahteva njeno presaditev.

Zdravljenje poteka predvsem z dvema zdraviloma - interferonom in ribavirinom.

Dokazali so svojo učinkovitost pri upočasnitvi procesa porazdelitve hepatocitov. Na poti je nujno predpisana infuzijska terapija, ki olajša delo jeter.

Vsi bolniki, ki so opazili povečanje števila virusnih delcev v krvi, so nujno prijavljeni pri hepatologu. Večkrat na leto se priporoča preventivni pregled, da se določi napredovanje procesa in pravočasno odkrivanje indikacij za presaditev. Poleg tega je možno uporabljati hepatoprotektorje, čeprav se mnenja zdravnikov nekoliko razlikujejo. Nekateri verjamejo, da ti zdravili omogočajo, da prekinete postopek in zaščitite še vedno nespremenjene hepatocite; drugi so prepričani, da jih ni smiselno jemati, zato je treba izvajati intenzivno protivirusno zdravljenje.

Tako hepatitis C spada v kategorijo bolezni, katere identifikacija predstavlja nekatere težave. Izboljšanje diagnostičnih metod in pravočasne preventivne preiskave bodo zmanjšali pojavnost te bolezni. Pomembno je tudi preprečevanje te bolezni. Eden mora skrbno izogibati stiku s krvjo, zavrniti jemanje drog, šele nato bo ta bolezen izkoreninjena. Glavna stvar pri preprečevanju in zdravljenju je zavesten odnos pacienta do svojega zdravja.

Izvajanje PCR analize za hepatitis C in dekodiranje rezultatov

PCR analiza hepatitisa C je študija, katere glavni namen je identificirati genetski material povzročitelja. Analiza razkriva povzročitelja bolezni z uporabo polimerazne verižne reakcije. Ta diagnoza ima visoko stopnjo natančnosti, specifičnosti za odkrivanje odsotnosti ali prisotnosti virusne okužbe.

Bistvo diagnoze

Za izvedbo analize PCR za določanje virusa hepatitisa C pri pacientu se vzame venska kri, ki potencialno vsebuje HCV (ribonukleinske kisline) želenega virusa RNA.

Test PCR za hepatitis C vključuje postopek za dodajanje bolnikovih krvnih delcev:

• primerji (kratke umetno sintetizirane regije potrebnega gena);
• poseben encim (RNA polimeraza).

Po vzorčenju se biološki material pošlje v raziskave v laboratorij. En del krvi je potreben za neposredno PCR analizo, drugi pa za testiranje s testom ELISA. Encim lahko v kratkem času poveča število genskega materiala virusa patogena. V posebni napravi se izvaja več ciklov toplotnih in hladilnih procesov. Na zadnji stopnji dobljeni material primerjamo z genoma virusa in sklepamo o prisotnosti ali odsotnosti patologije v telesu bolnika.

Bistvo in izvajanje PCR analize v laboratoriju. Posnelo SiberianMedicalLaboratory.

Vrste raziskav

Obstajajo 3 vrste diagnostike, ki omogočajo ugotavljanje prisotnosti virusa hepatitisa C v človeškem telesu:

• genotipizacija;
• kakovost;
• količinsko.

Kvalitativna metoda

Diagnoza hepatitisa C s kvalitativno metodo je primerna za bolnike, pri katerih so v krvi odkrite protitelesa proti virusu. V primeru prisotnosti akutne faze HCV RNA lahko takšni diagnostični ukrepi določijo prisotnost bolezni v 1-2 tednih po okužbi. V tem obdobju se protitelesa proti hepatitisu C morda še ne razvijejo.

Kvantitativna metoda

Za določitev koncentracije virusa v vzorcih krvi se uporablja kvantitativna diagnostična metoda. Tak test za viremijo (stopnja koncentracije) omogoča natančno določitev števila enot virusne RNA. Končni rezultat je izražen v ustreznem obsegu. Če govorimo o kvantitativni analizi, se kazalniki merijo v 1 ml (1 mladičev. Cm).

Parameter virusne obremenitve pomeni stopnjo nalezljivosti bolezni, kar pomeni, da odraža stopnjo "nalezljivosti" bolnika. V praksi to pomeni, da večja kot je koncentracija virusa v krvi, večja je možnost, da bolnik okuži druge s hepatitisom C. Kvantitativna raziskovalna metoda vam omogoča tudi ugotavljanje kakovosti in učinkovitosti zdravljenja.

Genotipizacija

Genotipizacija razkriva mutacije povzročitelja bolezni. Pred določitvijo načrta zdravljenja se določi genotip virusa: od tega je odvisna kakovost in trajanje zdravljenja. Na primer, pri zdravljenju bolezni tipa I je učinkovitost 60%, v primeru II, III-tipa pa približno 80%.

Prednosti PCR analize hepatitisa

Med glavnimi prednostmi postopka so:

1. Možnost zgodnje diagnoze. Analiza PCR je sposobna zaznati prisotnost virusa v zgodnjih fazah okužbe.
2. Rezultati nizke napake. Preučevani biološki vir vam omogoča diagnosticiranje dela genskega materiala, ki je značilen samo za eno vrsto virusne okužbe. Ta okoliščina omogoča preprečevanje napačnih diagnostičnih rezultatov.
3. Visoka stopnja občutljivosti. Analiza PCR je sposobna zaznati RNA virusa v majhnih količinah, kar prav tako omogoča pravočasno sledenje latentnih okužb.

Indikacije za

Testiranje za PCR za hepatitis C je potrebno, če je na voljo:

• stiki z bolnimi ljudmi, ki bi lahko privedli do okužbe;
• simptomi jetrne ciroze (povečanje vranice, neznačilne spremembe velikosti jeter, odkrivanje venskega pleksusa na trebuhu pod kožo);
• pozitivni rezultati testa ELISA;
• povečana aktivnost AST in ALT (ki se kaže v biokemični analizi krvi);
• potrebo po nadzoru izvajanja protivirusnega zdravljenja;
• začetno fazo zdravljenja zaradi potrebe po vzpostavitvi virusne obremenitve;
• izvedbo končne faze zdravljenja, da se izključijo možne ponovitve;
• pacient ima hepatitis B, da izključi nastanek mešane poškodbe jeter.

Kako se pripraviti na darovanje krvi za raziskave PCR

Priprava na analizo PCR vključuje naslednja priporočila:

• zjutraj se vzame kri;
• analiza poteka na prazen želodec, zato je priporočljivo, da si vzamete odmor med zadnjim vnosom hrane 8-10 ur;
• nekaj dni pred diagnozo je treba izključiti maščobne, začinjene in ocvrte hrane, alkoholne pijače in kajenje;
• dan pred analizo se je treba vzdržati težkih fizičnih naporov, izključiti razrede v telovadnici ali bazenu.

Rezultati analize: norme in odstopanja

Analiza sama po sebi ni dolgotrajna in visokokvalificirani specializirani hepatolog ali specialist za nalezljive bolezni dešifrira rezultate PCR za hepatitis C. Na podlagi rezultatov analize se bolniku postavi diagnoza.

Za pravilno dešifriranje rezultatov raziskave upoštevajo kazalnike: t

• biokemična analiza krvi;
• ultrazvočni podatki;
• rezultati biopsije.

Interpretacija kvantitativne analize

Pri pridobivanju rezultatov kvantitativne analize PCR se upoštevajo naslednji kazalniki:

PCR metoda za odkrivanje hepatitisa C

PCR je verižna reakcija s polimerazo, ki se uporablja za določanje prisotnosti hepatitisa C v serumu, rezultat pa je lahko pozitiven in negativen.

Prednosti metode PCR

Ta diagnostična metoda ima naslednje prednosti:

1. Metoda PCR omogoča določitev naslednjih rezultatov:
   • prisotnost RNA virusa;
   • stopnja sevanja;
   • izvirna genetska informacija;
   • edinstvenost in edinstvenost genetskih podatkov.
2. Uporabite lahko vse potrebne klinične materiale:
   • kri;
   • plazma;
   • urin;
   • telesne tekočine in izločki;
   • sputum in drugi.
3. Omogoča vam, da v krvi določite več kot en mikroorganizem naenkrat, za razliko od drugih vzorcev.
4. Pridobivanje rezultatov v 24 urah.
5. Poenostavljene metode za shranjevanje in transportne analize, patogeni se določajo tudi v mrtvem okolju.
6. Edinstvenost PCR vam omogoča identifikacijo določenih mikroorganizmov, ki niso primerni za noben drug vzorec.
7. Visoka stopnja občutljivosti reagentov, test je najbolj natančen.

Značilnosti kvalitativne analize PCR

Izvede se kvalitativni test, da se ugotovi prisotnost virusa v krvi in ​​dobi negativen ali pozitiven rezultat.

Indikacija za to vrsto diagnoze je odkrivanje protiteles proti hepatitisu C v bolnikovem telesu.

Možni rezultati:

• ugotovljeno (pozitivno);
• ni zaznano (negativno).

Preskus kakovosti ni primeren za bolnike z zelo nizko vsebnostjo virusa v krvi, zato ima določeno občutljivost.

Rezultat »zaznan«

Zaznavanje virusa hepatitisa C je lahko nekaj tednov po okužbi telesa, celo v odsotnosti protiteles na ta patogen. Ta rezultat kaže na prisotnost v telesu in v krvni skupini fragmenta RNA, značilnega za hepatitis C.

Bolnik je okužen s tem virusom in se v telesu še naprej širi.

Rezultat »ni zaznan«

Ta možnost kaže, da v vzorcu biološkega materiala, ki ga proučujemo, ni nobenih fragmentov RNA, specifičnih za hepatitis C. To je negativen rezultat.

Občutljivost testa ne razkriva nizke vsebnosti fragmentov RNA, zato rezultat „ni zaznan“ ni vedno verjeten.

Značilnosti interpretacije rezultatov

Glavna značilnost razlage rezultatov je mejna občutljivost metode PCR.

To je odvisno od naslednjih kazalnikov:

• natančnost študije;
• vrsto in kakovost uporabljene opreme.

Opozoriti je treba, da se lahko občutljivost giblje med 10-500 IU / ml. Iz tega sledi, da če je virus prisoten v telesu pacienta, ki je v raziskavi, pri koncentraciji, manjši od 10 ie / ml, bo test pokazal, da rezultat ni bil odkrit. Vendar to ne pomeni, da je patogen popolnoma odsoten.

Variante diagnostičnih sistemov

Trenutno obstajajo naslednje možnosti za diagnostične sisteme:

1. V primeru odvzema krvi bolniku, ki se zdravi z protivirusnimi zdravili, je treba uporabiti diagnostične sisteme z občutljivostjo najmanj 50 ie / ml. V ta namen se uporabljajo naslednji analizatorji: t
   • Cobas Ampicolor HCV test;
   • RealBest HCV RNA.
2. Za dokončno diagnozo "hepatitisa C" je potrebno odkriti RNA virus v treh različnih vzorcih bioloških snovi. Ta priporočila je razvila Svetovna zdravstvena organizacija. Če je rezultat trikrat negativen, diagnoza ni potrjena.
3. Trenutno je poleg metode PCR tudi natančnejši test, imenovan TMA (metoda transkripcijske ojačitve). Njegov prag občutljivosti je veliko višji kot pri drugih metodah diagnoze.

Razpon zaznanih sprememb virusov

Na tej stopnji razvoja genetike je znanih več vrst in različic modifikacije virusa.

Laboratorijska diagnostika v naši državi z absolutno natančnostjo lahko določi naslednje genotipove:

Značilnosti kvantitativne analize PCR

Kvantitativna analiza je definicija virusa hepatitisa C v človeškem telesu. Med študijo se RNA in virusna obremenitev v izhodnem materialu določita s PCR. V nasprotnem primeru lahko rečemo, da vam test omogoča, da ugotovite, koliko virusnih celic je v biološki tekočini. Za to vrsto študije se uporablja samo venska kri. Ni posebnega testnega pripravka.

Kvantitativna analiza vam omogoča nadzor na stopnji zdravljenja, ki se je že začela, in ocenjevanje njene učinkovitosti. Za vrednotenje se pred in med terapevtskimi posegi uporabijo podatki o preskusih. S pomočjo pridobljenih rezultatov je mogoče napovedati potek bolezni.

Z uspehom izbrane metode zdravljenja po 3 mesecih naj bi se količina RNA večkrat zmanjšala. Po priporočilih se kvantitativna analiza izvede po eni, nato po treh in šestih mesecih. Zadnji rezultat z uspehom zdravljenja mora biti negativen.

Ocena rezultatov kvantitativnega testa PCR

V naši državi obstajajo dve možnosti za oceno rezultata kvantitativnega testa PCR:

• število kopij na mililiter biološke tekočine;
• število mednarodnih enot na mililiter.

Za pridobitev mednarodnih enot se število kopij razdeli na 4.

• visoko s PCR nad 800.000 ie / ml;
• nizka pri PCR pod 400.000 ie / ml.

Rezultat kvantitativnega testa je 2 možnosti:

• "Pod merilnim območjem";
• "Ni zaznano" (negativno).

Ocena: "pod merilnim območjem"

Takšen zaključek je narejen, ko kvantitativni RNA test ni odkril povzročitelja hepatitisa C v viru celic, vendar je virus še vedno prisoten v krvi. Zanesljivost analize se potrdi s kvalitativno metodo, saj prag občutljivosti kvantitativnega preskusa morda ne zazna majhnih vrednosti in koncentracij patogena.

Ocena: »ni zaznano«

Takšna ugotovitev je bila ugotovljena, ko virusni virusi hepatitisa C med diagnosticiranjem niso bili odkriti v izvornem materialu, kar je negativen rezultat.

Interpretacija rezultatov analize kvantitativnega testa PCR

Z uporabo indikatorja virusne obremenitve določite:

• stopnjo zanemarjanja bolezni;
• kako nalezljiv je bolnik;
• učinkovitosti protivirusnega zdravljenja.

Čim večja je stopnja virusa hepatitisa C v telesu, pacient je bolj nevaren za druge ljudi in bolj napreduje njegova bolezen.

PCR s hepatitisom C je pomembna diagnostična metoda, zlasti med terapevtskimi intervencijami. Zaradi pridobljenih negativnih ali pozitivnih rezultatov je mogoče oceniti njihovo učinkovitost, popolnoma ozdraviti bolnika ali skrajšati čas zdravljenja.

Analiza PCR za hepatitis C

Za diagnozo "kronični virusni hepatitis C (CVHS)" je potrebna celovita preiskava osebe, ki vključuje klinične, laboratorijske in instrumentalne študije. Z vidika diagnoze za pravilno diagnozo je pomembna metoda verižne reakcije PCR-polimeraze.

Kaj kaže ta analiza in zakaj je potrebna?

Ta laboratorijska metoda odkriva RNA virusa hepatitisa C v človeški krvi. Skupaj z encimsko vezanim imunskim testom (ELISA) za protitelesa proti virusu se PCR uporablja za diagnozo CVHC in njenega patogenega genotipa. Ta raziskava je ena najnovejših metod laboratorijske diagnostike. Njegova zanesljivost pri CVHS presega 97%, kar velja za zelo dober kazalnik za raziskave.

Za CVHS so tri PCR krvne preiskave: kvalitativna, kvantitativna in genotipizacija virusa. Prva študija (kvalitativna analiza) virusa jo zazna v krvi in ​​se zato uporablja samo za diagnozo.

Druga (kvantitativna) študija določa stopnjo virusne obremenitve telesa, zato se uporablja za spremljanje učinkovitosti zdravljenja.

Tretja PCR (genotipizacija) pojasnjuje diagnozo, ugotavlja genotip virusa, kar je zelo pomembno za imenovanje pravilnega protivirusnega zdravljenja.

Bistvo tehnike verižne reakcije s polimerazo je uporaba encimov, ki množijo genski material patogena v biomaterialu. V postopku takega razmnoževanja se epruveta s krvjo večkrat segreje in ohladi na temperaturo, potrebno za pospešitev encimske reakcije. Zaradi teh manipulacij se količina virusnega genoma večkrat poveča, kar omogoča, da se odkrije tudi z minimalno količino.

PCR diagnostika ima veliko prednosti pred drugimi laboratorijskimi testi:

• visoka občutljivost - 97-98%;
• zajamčena analitična specifičnost (razkriva točno patogen, ki ga želite najti, in ne s tem povezanega seva);
• hitrost izvajanja (traja največ 2 dni, da se doseže sklep).

Tri vrste testov PCR

Visokokakovostna PCR analiza je dodeljena vsem bolnikom, pri katerih je ELISA analiza odkrila protitelesa proti virusu HVGS. Po izvedbi visokokakovostne PCR lahko dobimo dve odzivni možnosti: "zazna se RNA" ali "RNA ni zaznana." Za odkrivanje najmanjše količine virusa v krvi so potrebni testni sistemi z občutljivostjo najmanj 50 ie / ml. Če je koncentracija virusa v krvi bolnika manjša, kot jo lahko določi diagnosticum, je lahko rezultat študije lažno negativen. Da bi se izognili takšni diagnostični napaki, bi morali laboratoriji, ki izvajajo diagnostiko PCR, imeti visoko občutljive testne sisteme. V laboratoriju "Invitro" se na primer uporabljajo testi z občutljivostjo 15 IU / ml. Laboratorijski delavci so dolžni zagotoviti informacije o občutljivosti testov bolnikom in zdravnikom na njihovo prvo zahtevo.

Kvantitativna analiza PCR določa stopnjo viremije, to je koncentracijo patogena v krvi, virusno obremenitev. Rezultat te študije, v nasprotju z visokokakovostno PCR, je izražen v številkah, na primer 2 × 10 * 6 ie / ml, kar pomeni 2 milijona mednarodnih enot v 1 ml krvi. Nekateri laboratoriji uporabljajo drug kazalnik - število kopij / ml. Ta dva kazalca sta preprosta za pretvorbo: 1 mednarodna enota je enaka 4 izvodom RNA. Tako bo 2 x 10 x 6 ie / ml pomenilo, da je 8 x 10 x 6 kopij virusne RNA v 1 ml, t.j. 8 milijonov kopij v 1 ml krvi.

Genotipizacija je definicija enega od šestih genotipov virusa. Klinična slika, hitrost razvoja zapletov jeter in prognoza za prihodnje življenje bolnika sta odvisni od genotipa povzročitelja. Genotip virusa je zelo pomemben že v fazi diagnoze, saj je kombinacija zdravil in trajanje terapevtskega poteka, ki se dodeli bolniku, odvisna od njegove pravilne določitve.

Toda tudi ta navidezno »popolna« laboratorijska raziskava ima svoje pomanjkljivosti:

• študija ponavlja genetski material vseh patogenov, tudi neživih, ki lahko izkrivijo rezultat. Zato, da bi spremljali učinkovitost s pomočjo PCR, se ponovna analiza izvede ne prej kot 2 meseca po prejšnjem, tako da lahko mrtvi virusi »zapustijo« bolnika;
• del virusnega genoma, ki je določen z uporabo testnih sistemov, je lahko teoretično prisoten pri drugih virusih ali mikroorganizmih, zato obstaja možnost lažno pozitivnega odziva;
• virusi hitro mutirajo. Včasih je hitrost in obseg mutacije virusa tako visoka, da preskusni sistem preneha ujeti njihov genom. Posledično je možen lažno negativen rezultat.

Proizvajalci laboratorijskih testnih sistemov za diagnostiko PCR stalno izvajajo teste, vključno z navzkrižnimi reakcijami in občutljivostjo za določen genotip virusa.

Kako opraviti PCR test za hepatitis C?

Da bi bil zaključek preiskave PCR zanesljiv, je treba strogo upoštevati pravila priprave za njegovo izvajanje:

• študija poteka na prazen želodec (glukoza, maščobe, minerali, ki pridejo v kri iz hrane, lahko vplivajo na hitrost in kakovost encimske reakcije);
• vrzel med zadnjim obrokom in vzorčenjem krvi za analizo mora biti vsaj 8 ur;
• na predvečer študije je prepovedano jemanje alkohola in uživanje maščobnih živil, katerih obdobje izločanja je podaljšano;
• dan pred odhodom v laboratorij se mora izogibati močnemu fizičnemu in čustvenemu stresu;
• do odvzema vzorcev krvi ni priporočljivo kaditi.

Da bi se izognili pojavu napačnih zaključkov, mora domnevni bolnik priti v laboratorij malo prej kot vzeti krv. To traja 15-20 minut, da oseba ujame svoj dih, pomiri se. Adrenalin, ki je prisoten v krvi po hitrem sprehodu, lahko vpliva na rezultat pregleda.

Če pacient na analizo vzame kakšno zdravilo, mora o tem obvestiti zdravnika. Možno je, da bo treba nekatere od njih zavrniti že nekaj časa (če je mogoče).

Rezultat analize PCR za hepatitis C

Dekodiranje rezultatov je opravil laboratorijski zdravnik laboratorija, ki je opravil analizo. Dekodiranje je določanje odstopanja rezultata, dobljenega iz norme. Stopnjo kazalnikov določi neposredno proizvajalec testnega sistema, ki ga uporablja laboratorij za diagnostiko. Zato ni presenetljivo, da je v nekaterih laboratorijih virusna obremenitev določena v ie / ml, v drugih pa v kopijah / ml.

Po prejetju sklepa je treba biti sposoben pravilno razlagati. Zdravljenje rezultatov študije mora opraviti lečeči zdravnik bolnika s hepatitisom C. Zdravnik lahko le po objektivnem, instrumentalnem in laboratorijskem pregledu bolnika pridobi zadostno količino podatkov za pravilno interpretacijo dobljenih rezultatov PCR.

Ocenjevanje kvalitativne analize praviloma ne povzroča težav niti pri bolnikih. Rezultat je lahko samo eden: "odkrit" ali "ni zaznan". V tem primeru je drugi od njih norma.

Kazalnike kvantitativne analize je težje razlagati. Prikazuje stopnjo virusne obremenitve bolnika. Tudi med hepatologi ni soglasja o tem, kako zdraviti odkrito viremijo. Večina zdravnikov verjame, da je treba upoštevati veliko obremenitev več kot 8 × 10 x 5 ie / ml. Šteje se, da je obremenitev več kot 1 × 10 * 7 ie / ml zelo visoka, nizka obremenitev pa je manjša od 4 × 10 x 5 ie / ml.

Stopnja virusne obremenitve kaže na virulenco (agresivnost) virusa: večja je njegova količina v krvi, hitreje se lahko pojavijo zapleti jeter. Visoka koncentracija virusa v krvi nosečnice povečuje verjetnost njegovega prodiranja skozi hematoplacentno pregrado za plod. Viremija vpliva tudi na učinkovitost zdravljenja: pri nizkem številu je učinkovitost terapije višja kot pri visokih.

Da bi bili prepričani v natančnost analize PCR za hepatitis C, je treba dati prednost samo tistim laboratorijem, ki so dobro dokazani. Politika oblikovanja cen v tem primeru ne bi smela imeti glavne vloge.

Študija PCR na hepatitisu C: vrste, indikacije, transkript

Virusni hepatitis C je resna bolezen, ki se pojavi pri poškodbah jeter. Pri osemdesetih odstotkih bolnikov postane kronična. Virus se razmnožuje v jetrnih celicah - hepatocitih - in povzroči njihovo smrt. Mrtvo tkivo nadomesti žarišča vezivnega tkiva, razvije se fibroza.

Ker se fibroza razvija, jetra ne morejo opravljati svojih funkcij, začne se ciroza jeter, kar je nevarno za njene zaplete: povečan pritisk v sistemu portalne vene, gastrointestinalne krvavitve, motnje strjevanja krvi, duševne spremembe zaradi poškodb možganskih jeder s strupenimi proizvodi.

Vzrok bolezni je okužba z virusom iz družine Flaviviridae, ki pripada vrsti RNA virusov. To pomeni, da je genetski material, s katerim se sintetizirajo proteini patogena, kodiran v molekuli ribonukleinske kisline. Do okužbe pride po krvi, spolno in od nosečnice do ploda. Žal pa lahko dovolj veliko časa preide med okužbo in začetkom proizvodnje protiteles - od dveh tednov do šestih mesecev. To ne omogoča ugotavljanja okužbe z ELISA in začetkom zdravljenja v zgodnji fazi.

Kaj je PCR analiza?

PCR je metoda molekularne analize, ki omogoča odkrivanje genskega materiala patogena že v prvem tednu po okužbi s pomočjo verižne reakcije s polimerazo. Študija je imela visoko specifičnost, natančnost in omogoča ne le ugotavljanje prisotnosti ali odsotnosti virusa, temveč tudi njegovo koncentracijo in genotip.

Za študijo se odvzame kri pacienta, v kateri se lahko nahaja virusna RNA. V krvno umetno sintetizirane regije želenega gena majhne dolžine se dodajo prajmerji, RNA-polimeraza pa je poseben encim, ki večkrat poveča količino genskega materiala patogena. S posebnim aparatom izvedemo več ciklov ogrevanja in hlajenja. Nato se material analizira in primerja z znanimi geni virusa, na podlagi katerega se sklepa o prisotnosti ali odsotnosti okužbe.

Vrste PCR analize za hepatitis C

Obstajajo tri vrste analize PCR:

Kvalitativna analiza PCR. Prva faza študije. Omogoča vam identifikacijo genskega materiala virusa v krvi.

Kvantitativna analiza PCR. Omogoča določitev virusne obremenitve - koncentracija genskega materiala patogena v enem mililitru krvi. Ta študija se izvede pred začetkom zdravljenja, nato pa v prvem, četrtem, dvanajstem in (če je tečaj dolg) enaindvajseti teden zdravljenja, da se oceni njegova učinkovitost.

Genotipizacija Povzročitelj hepatitisa C pogosto in hitro mutira. Na planetu je bilo najdenih sedem variant tega genotipa virusa. V Rusiji so prvi, drugi in tretji tip pogosti. Vsak od genotipov ima drugačno odpornost na terapijo, na primer, učinkovitost zdravljenja prvega tipa je šestdeset odstotkov, za drugo in tretje pa ta številka doseže osemdeset pet. Da bi lahko izbrali ustrezna zdravila in predpisali dovolj dolgo trajanje zdravljenja, je treba natančno določiti, s katero vrsto virusa je bolnik okužen.

Indikacije za analizo PCR za hepatitis C

Študija PCR je predpisana v naslednjih primerih:

• stik z bolnikom, pri katerem se lahko pojavi okužba;
• imunski test pozitivnega encima;
• znaki ciroze jeter: sprememba velikosti jeter, povečana vranica, videz podkožnega venskega pleksusa na trebuhu;
• pojav simptomov poškodbe jeter: bolečine v desnem trebuhu, porumenelost kože;
• povečana aktivnost ALT in AST v biokemični analizi krvi;
• pred začetkom zdravljenja za določitev virusne obremenitve;
• spremljanje učinkovitosti protivirusnega zdravljenja;
• po zdravljenju za kontrolo relapsa;
• v prisotnosti diagnosticiranega hepatitisa B, da se izključi mešano poškodbo jeter.

Razlaga študij PCR na hepatitisu C

Dekodiranje PCR analize in encimskega imunskega testa za hepatitis C mora opraviti hepatolog ali specialist za nalezljive bolezni. Analiza rezultatov PCR je potrebna v kombinaciji s podatki biokemijske analize krvi, biopsije in ultrazvoka. Samo kvalificirani zdravnik bo lahko analiziral rezultate raziskav in na podlagi tega predpisal pravilno zdravljenje.

Dekodiranje kvalitativne analize.

V analiziranem biološkem materialu smo našli genetski material patogena. Okužba je potrjena.

Okužba je odsotna ali je količina RNA patogena pod mejo občutljivosti.

Dekodiranje kvantitativne analize.

Normalna stopnja za zdrave ljudi. To pomeni, da testni material ne vsebuje hepatitisa C RNA ali je njegova koncentracija pod pragom občutljivosti študije.

Koncentracija RNA je pod kvantitativnim razponom. Ti rezultati se zelo skrbno razlagajo, povežejo s podatki iz drugih študij, pogosto se ponovno preučijo.

Stopnja virusne obremenitve pri dani koncentraciji je nizka. Običajno zmanjšanje količine virusa pomeni, da je terapija uspešna.

Več kot 8 * 10 ^ 5 ie / ml

Stopnja virusne obremenitve pri dani koncentraciji je visoka.

Več kot 2,4 * 10 ^ 7 ie / ml

Količina RNA je nad zgornjo mejo obsega kvantifikacije. Nemogoče je sklepati o stopnji virusne obremenitve s tem rezultatom. Običajno se v takšnih primerih test ponovi z redčenjem vzorca krvi.

Dekodiranje genotipizacije.

RNK določenega genotipa

Virus hepatitisa C določenega genotipa in podtipa smo odkrili v biomaterialu. Rezultat je kodiran z rimskimi številkami in latinskimi črkami, na primer - 1a, 2b. Skupaj je sedem genotipov in šestdeset sedem podtipov, v Rusiji pa so samo tri prve vrste.

Zaznali smo RNA virusa hepatitisa C

RNK je bila najdena v krvi redkega genotipa za Rusijo, ki ga ni mogoče pripisati prvemu, drugemu ali tretjemu tipu. Potrebnih je več raziskav.

Ta rezultat kaže, da je bolnik zdrav ali da je količina patogene RNA premajhna.

Možno je, da je analiza PCR za hepatitis C negativna in encimsko vezan imunski test prepozna protitelesa proti virusu. To pomeni, da je bolnik imel akutni hepatitis C in si sam opomogel. Približno dvajset primerov okužbe povzroči spontano okrevanje, če ima bolnikovo telo zadostno odpornost na okužbo.

Čeprav je PCR zelo natančen, se lahko njegovi rezultati izkrivljajo v naslednjih primerih:

• kri je bila prenesena v laboratorij v neprimernih pogojih, temperatura je bila kršena;
• biomaterialni vzorec je bil kontaminiran;
• v krvi so ostale ostanke heparina in drugih antikoagulantov;
• Ugotovljeno je bilo, da so raziskovalci inhibitorji - snovi, ki upočasnjujejo ali ustavijo verižno reakcijo s polimerazo.

Prednosti PCR v primerjavi z drugimi metodami

Diagnoza v zgodnjih fazah. PCR zazna genetski material povzročitelja. Z imunofluorescenčno analizo lahko identificiramo le imunoglobuline - snovi, ki jih telo proizvaja kot odziv na okužbo. V primeru okužbe s hepatitisom C je lahko razlika med okužbo in začetkom imunskega odziva več tednov in mesecev, v tem času pa bo test ELISA neučinkovit. PCR bo dal odgovor v prvem tednu po okužbi.

Nizka verjetnost napake. V gradivu, ki ga proučujemo, določimo področje genskega materiala, ki je značilen samo za eno vrsto patogenov. To odpravlja napačne rezultate. Pri ELISA so možne napake, ker se lahko isti tip protiteles sprosti proti različnim virusom - takšna protitelesa se imenujejo navzkrižna protitelesa.

Visoka občutljivost. PCR omogoča odkrivanje povzročitelja RNA tudi v minimalnih količinah. To omogoča identifikacijo skritih okužb.

Kako se pripraviti na darovanje krvi za raziskave PCR

Za PCR analizo hepatitisa C se zbira venska kri. Običajno se iz bolnikove vene vzamejo dva dela krvi: prvi se pošlje na PCR, drugi pa na ELISA. To je storjeno z namenom, da se natančneje oceni, koliko je bolnik okužen z virusom, in kako se proti njemu bori imuniteta.

Običajno mora bolnik upoštevati naslednja pravila:

• zjutraj se opravi krvni test;
• Interval med zadnjim obrokom in darovanjem krvi mora biti od osem do deset ur;
• dva ali tri dni pred analizo je treba zapustiti ocvrto in mastno hrano ter alkohol;
• 24 ur pred analizo se mora bolnik izogibati fizičnemu naporu: ne nosite uteži, ne hodite v telovadnico ali bazen.