Načelo Štetje levkocitov med mikroskopijo na določenem številu kvadratov komore za štetje in izračun njihovega števila v 1 litru krvi ob upoštevanju razredčitve krvi in prostornine števne komore.
Reagent: 3-5% raztopina ocetne kisline, obarvana za obarvanje jeder levkocitov z nekaj kapljicami raztopine metilen modrega. Raztopina ima modro barvo, jo lahko shranjujete dolgo časa.
Potek odločnosti. V suho epruveto vlijemo 0,4 ml raztopine ocetne kisline. S prstom se zbere 0,02 ml krvi (lahko uporabite vensko kri, stabilizirano s antikoagulanti). Obrišite konico pipete, nato pustite kri iz nje na dno epruvete, premešajte, ponovno pokličite in pustite mešanico krvi in reagenta (pipetiranje). Označite epruveto in jo pustite do štetja. Shranjevanje mešanice krvi z raztopino ocetne kisline se priporoča ne več kot 2-4 ure.
Kri, razredčena v epruveti z ocetno kislino, dobro premešamo in napolnimo s štetno komoro. Napolnjena komora se pusti v vodoravnem položaju 1 min, da se usede bele krvne celice. Brez spreminjanja vodoravnega položaja fotoaparata ga postavijo na mizo mikroskopa in pri nizki povečavi (okular 10 ×, leča 8 ×) preštejejo bele krvne celice v 100 velikih kvadratih, kar ustreza 1600 majhnim.
Za večjo natančnost se levkociti preštejejo po mreži na velikih kvadratih, ki niso razdeljeni na majhne kvadrate in proge, začenši od zgornjega levega vogala mreže. Za boljši kontrast potemnite vidno polje, spustite kondenzator in zaprete zaslonko. Celice, ki se nahajajo znotraj kvadrata in ležijo na dveh linijah, se štejejo, da ne bi dvakrat šteli iste celice.
Izračun števila levkocitov se izvede po formuli:
kjer je X število levkocitov v 1 μl krvi; in - število levkocitov v 100 velikih kvadratih; 20 - redčenje krvi; 100 je število velikih kvadratov; 250 je pretvorbeni faktor na 1 μl, ker je prostornina enega velikega kvadrata 1/250 μl (stran kvadrata je 1/5 mm, višina je 1/10 mm).
V praksi je za izračun števila levkocitov v 1 μl krvi njihovo število v 100 velikih kvadratih pomnoženo s 50 in v 1 litru - dobljena vrednost se pomnoži s 106.
Opomba Pri štetju levkocitov je napaka neizogibna v 6–8% primerov.
- Z velikim številom normocitov v periferni krvi se štejejo v število levkocitov (obe levkociti in normociti - celice z jedrom). Za pravilno določitev števila levkocitov je treba od skupnega števila nukleiranih krvnih celic odšteti število normocitov.
- Preostale napake so podobne tistim, ki se pojavijo pri izračunu števila rdečih krvnih celic v komori za štetje.
Število levkocitov
Metoda štetja v fotoaparatu. Jemanje in redčenje krvi po metodi cevi. V cev vstavimo 0,4 ml tekočine za redčenje in 0,02 ml kapilarne krvi (po možnosti Vidalevskaya). Rezultat redčenja je praktično 1:20, običajno se kot razredčilo uporablja 3-5% raztopina ocetne kisline, obarvane z metilensko modro (lizi ocetne kisline, eritrociti, metilen modro barvo, jedra levkocitov). Pred polnjenjem komore Goryaeva cev z razredčeno kri se temeljito pretrese. Komora je napolnjena na enak način kot pri štetju rdečih krvničk.
Levkociti so veliko manjši od eritrocitov (1–2 na velik kvadrat), zato se za natančnost štejejo v 100 velikih kvadratih (nerazvrščenih). Izračun: 100 velikih kvadratov (1600 majhnih) se štejejo za levkocite.
Spomnimo se, da je volumen majhnega kvadrata 1/4000 mm3 in da je kri razredčena 20-krat, število levkocitov v 1 μl krvi je izračunano: 4000 20 in deljeno s 1600 = a x 1/2. Praktično, da bi dobili dejansko vsebnost levkocitov v 1 μl krvi, je dovolj, da delimo na polovico število, dobljeno v izračunu in dodamo 2 ničli. Povprečna napaka metode je ± 7%.
Natančnejša (2-3% napaka) in popolna je število levkocitov z uporabo elektronskih naprav. Štetje levkocitov v števcih delcev poteka po enakem principu kot eritrociti. Predkrovina se razredči in zmeša z vsemi reagenti, ki lizirajo rdeče krvne celice. V samodejnem analizatorju „Technicon“ se kot taka uporablja raztopina ocetne kisline v napravah „Culter“ in „Celloskop“ - saponin ali sapoglobin, ki se dodata razredčeni (1: 500, 1: 700) v izotonični raztopini natrijevega klorida (6 kapljic na 20 ml). vzrejo).
Število krvnih levkocitov se izvaja pri obarvanih razmazih periferne krvi.
Bolje je šteti na najtanjšem mestu blizu konca brisa, vsaj 200 celic (razen izrazite levkopenije) in nato izračunati odstotno razmerje nekaterih vrst belih krvnih celic. Štetje se priporoča v enakem vrstnem redu: polovico celic je treba šteti na vrhu, polovico na dnu kapi, ne da bi šli do samega roba in sredine, cik-cak (3-4 vidna polja ob potezi, 3-4 polja pod pravim kotom do sredine udarca, nato 3-4 polja na stran, vzporedno z robom, spet pod pravim kotom navzgor in tako naprej na eno stran).
Priprava brisov. Previdno oprano in razmaščeno steklo (njegov rob) se dotakne kapljice krvi na mestu injiciranja. Razmažite brusilno steklo in ga postavite pod kotom 45 ° proti drsniku pred padcem. Ko je steklo pripeljalo do te kapljice, počakajo, da se kri širi vzdolž njenega roba, nato pa s hitrim in enostavnim gibanjem izvedejo brusilno steklo naprej, ne da bi ga vzeli stran, preden izsuši celotno kapljico.
Pravilno izdelan madež je rumenkaste barve (tanek), ne doseže robov stekla in se konča v sledu (brki).
Obarvanje suhih brisov po predhodni fiksaciji. Najboljša fiksacija je dosežena v absolutnem metilenskem alkoholu (3-5 minut) ali v mešanici Nikiforovih enakih delov absolutnega etanola in etra (30 minut).
Glavne hematološke barve so metilen modra in njen derivat - azurno (metilen azurno) in azurno modro (mešanica enakih delov azurnega I in metilensko modro), do kislega - vodotopnega rumenega eozina.
● Slikarstvo Romanovskega-Giemsa. Romanovsky-Giemsa barva (tovarniško izdelana) ima naslednjo sestavo: Azur II - 3 g, vodotopni rumeni eozin - 0,8 g, metilni alkohol - 250 ml in glicerin - 250 ml. Delovna barvna raztopina se pripravi v količini 1,5-2 kapljice končne barve na 1 ml destilirane vode. Barvo se nalije na razmaz z možno višjo plastjo; čas barvanja - 30-35 minut Po tem obdobju se brisi sperejo z vodo in posušijo na zraku. Pri tej metodi je mogoče dobro razlikovati jedro, vendar je nevtrofilna zrnavost citoplazme veliko slabša, zato se pogosto uporablja za obarvanje razmaza periferne krvi.
● Kombinirana barvila May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa po Pappenheimu. Končno barvilo, May-Grunwaldov fiksir, ki je raztopina eozinmetilen modrega v metilenskem alkoholu, 3 minute pipetiramo na fiksni razmaz. Po 3 minutah k barvi, ki pokriva raztopino, dodamo enako količino destilirane vode in barvo nadaljujemo še 1 minuto. Po tem se barva izpere in bris posuši na zraku. Potem se posušen razmaz prebarva s sveže pripravljeno vodno raztopino Romanovsky barve za 8-15 minut. Ta metoda se šteje za najboljšo, zlasti za madeže kostnega mozga.
Povečanje števila levkocitov v periferni krvi nad normalno raven se imenuje levkocitoza, zmanjšanje pa se imenuje levkopenija. Za levkocitozo (levkopenija) je redko značilno sorazmerno povečanje (zmanjšanje) števila vseh vrst levkocitov, na primer levkocitoza z zgostitvijo krvi. V večini primerov se poveča število (zmanjšanje) katerega koli tipa celice. Povečanje ali zmanjšanje števila posameznih vrst levkocitov v krvi je lahko relativno ali absolutno, odvisno od skupnega števila levkocitov - normalno, povišano ali zmanjšano. Sprememba števila, razmerja med posameznimi oblikami in morfologijo levkocitov je odvisna od vrste in virulence patogena, narave, poteka in obsega patološkega procesa, individualne reakcije organizma.
Metoda štetja levkocitov v komori Goryaev
Bele krvne celice - bele krvne celice - igrajo pomembno vlogo pri protimikrobni zaščiti telesa. Granulociti mikroorganizmi fagocitirajo in jih uničijo s pomočjo encimov v granulah, limfociti proizvajajo protitelesa in zagotavljajo imunski odziv na telo.
Metoda določanja metode epruvete: v epruveto vlijemo 0,4 ml raztopine Türka (Türkova tekočina vsebuje ocetno kislino, da uničimo rdeče krvne celice in metilen modro za obarvanje jeder levkocitov). S kapilarno pipeto potegnite 0,02 ml krvi iz sveže kapljice, nežno jo vnesite v epruveto z reagentom in pipeto sperite. Dobro premešajte. Hkrati je razredčenje krvi 20-krat. Na koncu okrogle steklene palice zberemo kapljico razredčene krvi in jo nanesemo na rob polirane steklene komore.
Štetje poteka v 100 velikih neprekinjenih kvadratih, ki jih sestavljajo štirje. Uporabili so majhno povečanje.
Izpeljava števne formule št.
1. 100 kvadratov vsebuje 1600 majhnih kvadratov (16 x 100)
2. Prostornina krvi nad majhnim kvadratom 1/4000 mm3
3. Razredčevanje krvi 20-krat
Število levkocitov v 1 μl krvi = pri -4000-20. = Ax 50
Na primer: 130 levkocitov je bilo preštetih v 100 velikih kvadratih Goryavove mreže. V 1 μl krvi bo število levkocitov 130 x 50 = 6500 ali 6,5–10 3.
Da bi določili vsebnost levkocitov v 1 litru krvi, je treba število levkocitov, izraženo v tisočih, pomnožiti z 10 9.
V našem primeru je število levkocitov v 1 litru krvi 6.5-10 9.
194.48.155.245 © studopedia.ru ni avtor objavljenih gradiv. Vendar pa ponuja možnost brezplačne uporabe. Ali obstaja kršitev avtorskih pravic? Pišite nam Povratne informacije.
Onemogoči adBlock!
in osvežite stran (F5)
zelo potrebno
Število levkocitov v krvi
Levkocitoza je lahko absolutna (resnična) in relativna (redistributivna).
Absolutno levkocitozo opazimo pri akutnih vnetnih procesih, nekrozah tkiv, akutnih bakterijskih okužbah (z izjemo tifusne vročine, bruceloze, tularemije itd.), Alergijskih stanj, malignih tumorjev (z uničenjem tkiva), zaprtih poškodb glave in krvavitev v možganih, sladkorne bolezni. uremična koma, šok, akutna izguba krvi, kot primarna reakcija - z radiacijsko boleznijo. Pri levkemiji pride do znatnega povečanja števila levkocitov.
Relativna (redistributivna) je posledica prejema levkocitov v pretoku krvi iz organov, ki služijo njenemu skladišču. Pojavi se po jedi (levkocitoza hrane), vročih in hladnih kopelih, močnih čustvih (vegetovaskularna levkocitoza), intenzivnem mišičnem delu (miogena levkocitoza) itd.
Leukopenija Leukopenija velja za indikator inhibicije funkcionalne sposobnosti kostnega mozga zaradi izpostavljenosti strupenim snovem (arzen, benzen itd.), Nekatera zdravila (sulfanilamidi, kloramfenikol, butadion, imuno, ciklofosfamid itd.), Virusi (gripa, virusni hepatitis)., ošpice itd.), mikrobi (tifus, bruceloza itd.), ionizirajoče sevanje, rentgenski žarki in hipersplenizem (povečana funkcija vranice).
Za levkocitozo in levkopenijo je značilno, da je sorazmerno povečanje (zmanjšanje) skupnega števila vseh vrst levkocitov (npr. Levkocitoza z zgoščevanjem krvi); v večini primerov se poveča (zmanjša) število kateregakoli tipa celic, zato se uporabljajo izrazi "nevtrofilija", "nevtropenija", "limfocitoza", "limfopenija", "eozinofilija", "eozinopenija", "monocitoza", "monocitopenija"., "Bazofilija."
Pri klinični oceni sprememb števila levkocitov je velik pomen pripisan odstotnemu razmerju posameznih oblik levkocitov, to je levkocitne formule.
Levkocitna krvna slika zdrave osebe:
Relativni znesek Absolutni znesek
Bazofili ……………………….0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l
Eozinofili …………………….0.5-5% 0.02-0.30 x 10 9 / l
Neutrofili: - mielociti............ 0% odsotni
- zabodel... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l
- segmentirano….47-72% 2,0-5,5 x 10 9 / l
Limfociti …………………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / L
Monociti ………………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / L
Štetje levkocitov se izvaja pri obarvanih razmazih periferne krvi. Za pravilno interpretacijo rezultatov študije levkocitne formule je priporočljivo šteti v absolutnih količinah, ne pa v relativnih. Najpogostejše metode slikanja brisov Romanovskega-Giemsa, Pappenheim. Pri potopitvi se prešteje vsaj 200 celic in nato izračuna odstotno razmerje nekaterih vrst levkocitov. Analiza levkograma ob upoštevanju drugih krvnih parametrov in klinične slike je dragocena metoda pregleda, pomaga pri diagnozi in določanju prognoze bolezni.
Glavni vzroki nevtrofilije.
Akutne bakterijske okužbe - lokalizirane in generalizirane.
Vnetje ali nekroza tkiva.
Zdravilni učinki (kortikosteroidi).
Glavni vzroki nevtropenije.
Okužbe - bakterijske (tifus, bruceloza, tularemija, paratifus) in virusne (infekcijski hepatitis, ošpice, gripa, rdečke in drugi).
Mielotoksični učinki in supresija granulocitopoeze (ionizirajoče sevanje; kemična sredstva - benzen, anilin, DDT; zdravilni učinki - citostatiki in imunosupresanti; vitamin B12-anemija pomanjkanja folne kisline, akutna alevkemična levkemija, aplastična anemija).
Izpostavljenost protiteles (imunske oblike) - preobčutljivost na zdravila, avtoimunske bolezni (SLE, revmatoidni artritis, kronična limfna levkemija), izoimunske manifestacije (hemolitična bolezen novorojenčka).
Prerazporeditev in odlaganje v organih - šok, bolezni s splenomegalijo in hipersplenizem.
Dedne oblike (družinska benigna kronična nevtropenija).
Glavni vzroki eozinofilije.
Parazitske invazije (trihinoza).
Kronične kožne spremembe - luskavica, pemfigus, ekcem.
Tumorji (eozinofilne variante levkemije).
Druge bolezni - fibroplastični endokarditis Lefflera, škrlatinka.
V fazi okrevanja okužb in vnetnih bolezni (ugoden prognostični znak).
Vzroki eozinopenije (aneozinofilija).
Povečana aktivnost adrenokortikosteroidov v telesu.
Glavni vzroki za bazofilijo:
Kronična mieloidna levkemija in eritremija.
Glavni vzroki monocitoze.
Subakutne in kronične bakterijske okužbe.
Parazitske okužbe - leishmaniasis, malarija.
Hemoblastoza - monocitna levkemija, limfogranulomatoza, limfomi.
Druga stanja so SLE, sarkoidoza, revmatoidni artritis, infekcijska monocitoza; v obdobju okrevanja po okužbah, pri opustitvi agranulocitoze, po splenektomiji.
Zmanjšanje števila monocitov je pomembno predvsem pri ocenjevanju limfocitno-monocitnega razmerja pri pljučni tuberkulozi.
Glavni vzroki limfocitoze.
Okužbe - akutne virusne (infekcijska mononukleoza, ošpice, rdečke, piščanci), kronične bakterije (tuberkuloza, sifilis, bruceloza), protozojske (toksoplazmoza).
Hemoblastoza (limfocitna levkemija, limfom).
Druge bolezni - hipertiroidizem, Addisonova bolezen, vitamin B12-anemija zaradi pomanjkanja folij, hipo-in aplastična anemija.
Limfocitopenija je opažena pri SLE, Hodgkinovi bolezni, razširjeni tuberkulozi bezgavk, v terminalnem stadiju ledvične odpovedi, akutni radiacijski bolezni, stanju imunske pomanjkljivosti, jemanju glukokortikoidov.
Povečanje ali zmanjšanje števila nekaterih vrst levkocitov v krvi je lahko relativno ali absolutno. Če se pojavlja le odstotek določene vrste sprememb belih krvnih celic, potem pride do relativne nevtrofilije, relativne eozinopenije itd. Povečanje ali zmanjšanje absolutne vsebnosti vseh vrst levkocitov, to je število teh celic na enoto volumna krvi, se imenuje absolutna nevtrofilija, absolutna eozinopenija itd.
Premik formule na levo (povečanje števila mladih oblik nevtrofilcev) je znak vnetja ali nekrotičnega procesa v telesu.
Premik levkocitne formule v desno je značilen za radiacijsko bolezen in vitamin B12-anemija pomanjkanja folne kisline.
Odsotnost ali znatno zmanjšanje števila vseh vrst zrnatih levkocitov - granulocitov (nevtrofilcev, eozinofilcev, bazofilcev) označuje izraz agranulocitoza. Glede na mehanizem pojavljanja se razlikujejo mielotoksičnost (učinki ionizirajočega sevanja, citostatični vnos) in imunski (hapten in avtoimunska agranulocitoza).
Levkociti (levkociti)
Levkociti. Kvantitativna določitev levkocitov. Štetje levkocitov z uporabo kamere Goryaeva. Kvantitativna vsebnost levkocitov. Levkocitoza.
Bele krvne celice
Število levkocitov v krvi je odvisno tako od hitrosti njihovega nastajanja kot od njihove mobilizacije iz kostnega mozga, pa tudi od njihove uporabe in migracije v tkiva (v lezije), zajema pljuča in vranice. Na te procese vplivajo številni fiziološki dejavniki, zato je število levkocitov v krvi zdravega človeka odvisno od nihanj: do konca dneva, med fizičnim naporom, čustvenim stresom, vnosom beljakovinskih živil in nenadnimi spremembami temperature okolja.
Kvantitativna določitev levkocitov
Levkocite preštejemo z Goryaevovo kamero in z uporabo samodejnih števcev.
Štetje levkocitov z uporabo kamere Goryaeva
Z in vitro metodo odvzema krvi za štetje levkocitov:
- V epruveto se vlije 0,4 ml raztopine 3-5% ocetne kisline, obarvane z metilensko modro. S kapilarno pipeto potegnite 20 μl krvi iz sveže kapljice (20-kratno razredčenje), previdno jo odnesite v epruveto z reagentom in pipeto sperite. Dobro premešamo;
- čisto in suho pokrivno steklo se vtisne v komoro, tako da se na točki dotika oblikujejo mavrični obroči;
- raztopimo v epruveti, dobro premešamo. Konec okrogle steklene palice vzame kapljico krvi in jo pripelje na rob poliranega stekla komore;
- po polnjenju komore se pusti 1 minuto mirovanja za sedimentacijo levkocitov;
- Upoštevajo se levkociti pri majhni povečavi (objektiv × 8 ali × 9, okular × 10 ali × 15) s temnim vidnim poljem (s spuščenim kondenzatorjem ali zoženo membrano);
- za zadovoljive rezultate se levkociti preštejejo v 100 velikih kvadratov.
Poznavanje prostornine velikega kvadrata in stopnje razredčitve krvi, našli število levkocitov v 1 μl in 1 l krvi. Stranica velikega kvadrata je 1/5 mm, površina je 1/25 mm2, prostornina prostora nad tem kvadratom pa je 1/250 mm3.
Formula za štetje belih krvnih celic:
kjer je B število levkocitov v 100 velikih kvadratih;
P - stopnja razredčitve (20).
Število levkocitov
Norm: 4,0–9,0 × 10 9 / L
Poveča se število levkocitov nad 9,0 × 10 9 / l
levkocitoza, zmanjšanje njihovega števila pod 4,0 × 10 9 / l - levkopenija. Vendar je lahko norma tudi 3,5 × 10 9 na 1 l levkocitov za številne posameznike. Glede na literaturo imajo takšni ljudje večjo imunsko odpornost in je manj verjetno, da bi se razboleli, kar je verjetno posledica potrebe po imunskem odzivu, da imajo rezerve levkocitov v tkivih, kjer je 50–60-krat več kot v krvnem obtoku. Očitno je, da se pri zdravih osebah z nizkim številom belih krvnih celic v periferni krvi njihove zaloge v tkivih ustrezno povečajo. Ta pojav je pojasnjen z dednim in družinskim značajem ali s povečanjem vpliva parasimpatičnega živčnega sistema.
Leukopenija je lahko funkcionalna in organska.
Funkcionalna levkopenija je povezana z disregulacijo tvorbe krvi in je opažena:
- z nekaterimi bakterijskimi in virusnimi okužbami (tifus, gripa, črne koze, rdečke, Botkinova bolezen, ošpice);
- pod delovanjem zdravil (sulfonamidi, analgetiki, antikonvulzivi, antitiroidi, citostatiki in druga zdravila);
- pri mišičnem delu, vnos tujih beljakovin, živčnih in temperaturnih učinkov, stradanje, hipotonično stanje;
- pri dolgotrajnem shranjevanju krvi pri sobni temperaturi (več kot 4 ure) lahko pride do povezovanja lažne levkocitopenije z agregacijo levkocitov.
Organska levkopenija, ki je posledica aplazije kostnega mozga in njene zamenjave z maščobnim tkivom, se pojavi, ko: t
- aplastična anemija;
- agranulocitoza;
- levkopenična levkemija;
- nekatere oblike Hodgkinove bolezni;
- ionizirajoče sevanje;
- hipersplenizem (primarni in sekundarni);
- bolezni kolagena.
Levkocitoza
Levkocitoza je reakcija hematopoetskega sistema na učinke
eksogeni in endogeni dejavniki. Obstajajo fiziološke in patološke levkocitoze.
Fiziološka levkocitoza je:
- prebavni - po jedi, še posebej visoko vsebnost beljakovin; število levkocitov ne presega 10,0–12,0 × 10 9 / l in se po 3-4 urah vrne v normalno stanje;
- s čustvenim stresom (adrenalin), hudim fizičnim naporom, ohlajanjem, prekomernim izpostavljenostjo soncu (sončnim opeklinam), dajanjem številnih hormonov (kateholamini, glukokortikosteroidi itd.), v drugi polovici nosečnosti, med menstruacijo in zaradi neenakomerne porazdelitve levkocitov v krvi mainstream.
Patološka levkocitoza je razdeljena na absolutno in relativno.
Absolutna levkocitoza - povečanje števila levkocitov v krvi do več sto tisoč (100,0–600,0 × 10 9 / l in več).
- Najpogosteje opaziti pri levkemiji: pri kronični levkemiji - v 98-100% primerov, pri akutni levkemiji - v 50-60%. Spreminjanje razmerja levkocitnih celic v kostnem mozgu in krvni punktaciji služi kot osnova za diagnozo levkemije.
Opazujemo relativno levkocitozo:
- akutni vnetni in infekcijski procesi, razen tifusne, gripe, črnih koz, rdečk, Botkinove bolezni, ošpic. Največjo levkocitozo (do 70,0–80,0 × 10 9 / l) opazimo pri sepsi;
- pod vplivom strupenih snovi (strupi insektov, endotoksini), ionizirajoče sevanje (takoj po obsevanju);
- zaradi delovanja kortikosteroidov, adrenalina, histamina, acetilholina in preparatov digitalisa;
- z razpadanjem tkiva (nekroza), miokardnim infarktom, trombozo perifernih arterij z razvojem gangrene, opeklin, eksudativnim plevritisom, perikarditisom, uremijo, jetrno komo;
- pomembna izguba krvi pri poškodbah, notranje, ginekološke in druge krvavitve.
Povečanje števila levkocitov pri nalezljivih boleznih v večini primerov spremlja premik levkocitne formule v levo
Število levkocitov in število levkocitov.
Za štetje levkocitov se kri razredči v mešalnikih ali v epruvetah. V ta namen uporabite 3-5% raztopino ocetne kisline (za uničenje rdečih krvnih celic), obarvano z vsemi anilinskimi barvili (za obarvanje jeder levkocitov). Števec se zapolni na enak način kot za štetje rdečih krvničk. Levkociti se štejejo v 100 velikih kvadratov. V omrežju Goryaev je primerno, da jih preštejemo na nerazkritih kvadratih (na njih je 100) Glede na redčenje krvi in prostornino tekočine nad kvadrati izračunajte konstantni množilec. Pri vzreji 20-krat je 50-krat.
Pri delu s epruvetami vnašajo v njih 0,38 ml tekočine in vanje sprostijo 0,02 ml krvi. Za izračun avtomatskega štetja v epruvetah se rdeče krvne celice hemolizirajo s saponinom. Normalno število belih krvnih celic je 4.3 • 10 9 -11.3 • 10 9 / l ali 4300-11 300 v 1 μl krvi.
Število preiskovanih levkocitov je bilo šteto v obarvanih razmazih.
Dober razmaz izpolnjuje naslednje zahteve: tanek in oblikovani elementi ležijo v njem v eni plasti; v tem primeru je brisanje rumeno in prosojno. Dober razmaz je enak, celice pa se ne razmažejo. Da bi kri ležala enakomerno na steklu, jo razmaščimo s sežiganjem plinskega gorilnika nad plamenom ali v mešanici alkohola in etra. S koncem stekla se dotaknejo sveže sproščene majhne kapljice krvi in jo nemudoma razširijo na steklo. Pred barvanjem se razmaz fiksira s potapljanjem v metanolu 3 minute, v etanolu ali njegovi mešanici z etrom 30 minut. Obstaja več drugih fiksirjev. Bris, posušen po fiksaciji, se napolni z barvilom.
Za razlikovanje krvnih celic (definicije levkocitne formule) uporabite diferencialno barvanje. Najbolj razširjena barvila Romanovsky-Giemsa. To barvilo je mešanica šibko kislih (eozin) in šibko alkalnih (azurno modrih) barv. Celice in njihovi deli, odvisno od reakcije medija, zaznavajo eno ali drugo sestavino barvil v njih: kisle (bazofilne) snovi so obarvane modro, alkalno (oksifilno) obarvani eozin rdeče; Nevtralno zazna obe barvi in postane vijolična.
Leukocitna formula se nanaša na odstotek posameznih oblik krvnih levkocitov.
Za dovolj natančen izračun je potrebno videti vsaj 200 belih krvnih celic.
Štetje poteka s potopnim sistemom. Ker so celice neenakomerno razporejene v razmazu (večje segajo do robov), je pomembno, da se držimo takšnega vrstnega reda gibanja na razmazu, v katerem bi bili njegovi robovi in srednji del enako gledani. Uporablja se eden od dveh načinov premikanja: eden od njih premakne pot od zgornjega roba do spodnjega, premakne 2 do 3 vidna polja vzdolž roba, nato pa gre v nasprotni smeri proti zgornjemu robu, itd. —6 polj do sredine udarca, nato enako količino vstran, nato nazaj na rob, premaknite več polj stran in ponovite gibanje, dokler se ne prešteje 50 celic. Oglejte si 4 od teh lokacij na 4 vogalih brisa. Število 200 celic, število se razdeli na polovico in določi število posameznih vrst belih krvnih celic.
Levkociti so elementi krvi, ki se hitro odzovejo na različne zunanje vplive in spremembe v telesu. Določitev skupnega števila levkocitov je lahko zelo diagnostična vrednost, saj razkriva stanje krvotvornih organov ali njihov odziv na škodljive učinke. Povečanje števila levkocitov - levkocitoza - je posledica aktivacije levkopoeze, zmanjšanje njihovega števila - levkopenija - je lahko odvisno od zaviranja krvotvornih organov, njihovega izčrpanja in povečane razgradnje levkocitov pod vplivom protilevocitnih protiteles 1. Neutrofili. Najbolj variabilna skupina levkocitov so nevtrofilci, katerih število se povečuje s številnimi okužbami, zastrupitvami in razpadanjem tkiva.
Za aktivno nevtroniziranje je značilno ne le povečanje skupnega števila nevtrofilcev v krvi, temveč tudi pojav nezrelih oblik v njem: število stab-nosilnih celic se poveča, pojavijo se mladi nevtrofilci, včasih celo mielociti. To "pomlajevanje" nevtrofilne sestave se imenuje premik levkocitov v levo. Zaščitno vlogo nevtrofilcev določata njihova fagocitna funkcija, baktericidno delovanje in sproščanje proteolitičnih encimov, ki spodbujajo resorpcijo nekrotičnega tkiva in celjenje ran.
Najpogosteje pride do regenerativnega premika v prisotnosti kakršnega koli vnetnega procesa ali žarišča nekroze. Zelo oster levi premik na promyelocytes in celo myeloblasts s pomembno levkocitozo se imenuje leukemoid reakcija. Zmanjšanje števila nevtrofilcev - absolutna nevtropenija - se pojavi, ko kostni mozeg zavira izpostavljenost toksinom nekaterih mikroorganizmov (povzročiteljev tifusne vročine, bruceloze itd.) In virusov, ionizirajočemu sevanju, številnim zdravilom.
2. Limfociti. Limfocitoza je opažena v obdobju okrevanja po akutnih nalezljivih boleznih, z infekciozno mononukleozo, infekcijsko limfocitozo, limfocitno levkemijo, rdečkami, brucelozo, tirotoksikozo.
Absolutna limfopenija se pojavi pri sevalni bolezni, sistemskih poškodbah limfnega sistema: limfomu, limfosarkomu.
3. Eozinofili. Najdemo jih v krvi v sorazmerno majhnih količinah (najdemo jih predvsem v tkivih), vendar se njihovo število včasih bistveno poveča pri alergijskih procesih (serumska bolezen, bronhialna astma), helmintske invazije in pruritične dermatoze.
Pri sepsi, hudih oblikah tuberkuloze, tifusu in hudi intoksikaciji opazimo zmanjšanje števila eozinofilcev - eozinopenije - do njihovega popolnega izginotja.
4. Bazofili. So nosilci pomembnih mediatorjev presnove tkiv ("ekvivalenti" maščobnih celic). Ko je organizem senzibiliziran, se njihovo število poveča in ko se alergen ponovno uvede, se močno zmanjša zaradi njihove razčlenitve.
5. Monociti. Povečanje števila monocitov - monocitoza - je pokazatelj razvoja imunskih procesov. Monociti so prepoznani kot analogi tkivnih makrofagov. Monocit se nahaja v številnih kroničnih boleznih (kroniosepsija, tuberkuloza, sifilis). Monocitopenija je včasih opažena pri hudih septičnih, hipertoksičnih oblikah tifusa.
Agranulociti. Značilnost agranulocitov so nerazsežna jedra in bazofilna (modra) citoplazma.
Limfociti so najmanjša velikost levkocitov. Jedro je okrogle, ovalne ali fižolaste oblike; zavzema večino celice, intenzivno obarvan. Citoplazma večine limfocitov z ozkim robom obdaja jedro, je obarvana v svetlo modri barvi in je očiščena do jedra.
Monocit je največji od krvnih celic. Veliko jedro nepravilne oblike in relativno svetle barve. Citoplazma je sivkasto-modra, zadimljena barva, ki ni bistra do jedra
Poleg teh celic je v redni krvi redka, plazemske celice pa se pogosto pojavijo pri boleznih. Odlikuje jih ekscentrično gosto jedro, pogosto kolesaste strukture. Število teh celic se povečuje z nekaterimi nalezljivimi boleznimi, sepso pri ranah in multiplim mielomom.
Pri izračunu levkocitne formule se pozornost namenja ne le kvantitativnim premikom v njej, temveč tudi kvalitativnim spremembam elementov oblike. Prej so opazili degenerativne spremembe levkocitov. Pri hudi intoksikaciji postane zrnatost nevtrofilcev obilna, velika, intenzivno obarvana in se imenuje strupena (ali toksogena). Včasih se krvne madeže nahajajo v krvnih razmazih, pobarvanih kot jedrska snov levkocitov. To so tako imenovane sence Botkin - Humprecht - ostanki jedrske kromatine, ki kažejo na povečano krhkost levkocitov, kar vodi do njihove razgradnje - levkocitoliza
99. Metode določanja krvne skupine, koncept Rh faktorja.
1. Določanje krvne skupine s standardnimi serumi: t
Potrebna je naslednja oprema:
o dva niza standardnih skupin hemaglutinirajočih serumov I (0), II (A), III (B) iz dveh različnih serij in ena viala seruma IV (AB)
o steklenico z izotonično raztopino natrijevega klorida s pipeto
o očistite suho ploščo
o steklena stekelca
o sterilne igle za kopje za prebadanje prsta
o sterilne krogle iz gaze,
Standardni serumi za določanje krvne skupine po sistemu ABO so izdelani s posebno barvno oznako.: I (0) - brezbarven, II (A) - modra, III (B) - rdeča, IV (AB) - rumena. Serum shranjen pri 4-10 ° C. Serum mora biti lahek in pregleden. Prisotnost kosmičev, sedimentov, motnosti so znaki neprimernosti seruma. Prvi znaki aglutinacije se morajo pojaviti najkasneje 30 sekund.
Plošča je razdeljena na 4 kvadrate z barvnim svinčnikom in v smeri urinega kazalca označena s kvadrati I (0), II (A), III (B). Velika kapljica seruma iz dveh serij I (0), II (A), W (B) se s pipeto postavi v ustrezen kvadrat plošče. Pladenj za prste je obdelan z alkoholom, koža pa je prerezana. Prvo kapljico krvi odstranimo s kroglico iz gaze, kasnejše kapljice v različnih delih stekelca zaporedno nanesemo na kapljice seruma in temeljito premešamo. Kapljica krvi naj bo 5-10-krat manjša od kapljice seruma. Nato s stresanjem ploščo temeljito premešamo kri s serumom. Predhodne rezultate ocenimo po 3 minutah, nato dodamo kapljico izotonične raztopine natrijevega klorida, ponovno zmešamo s stresanjem plošče in po 5 minutah izvedemo končno oceno reakcije aglutinacije.
Z pozitivnim izohemaglutinacijskim testom se kosmiči in jedrca iz adheriranih rdečih krvnih celic pri dodajanju izotonične raztopine natrijevega klorida in mešanju ne razlikujejo.
Ko je negativna reakcija kapljice seruma na krožnik transparenten, enakomerno roza, ne vsebujejo kosmičev in zrn.
Možne so naslednje 4 kombinacije aglutinacijskih reakcij s standardnimi serumi skupin I (0), II (A), III (B).
v Vsi 3 serumi v obeh serijah se ne aglutinirajo. Krvni test -
I skupino.
v Negativna reakcija izohemaglutinacije s serijskimi skupinami P (A) obeh serij in pozitivnimi skupinami seruma I (0) in III (B). Krvni test -
II (A).
v Reakcija izohemaglutinacije je negativna pri serumu skupine III (B) v obeh serijah in pozitivna pri serumu skupin I (0) in II (A). Krvni test -
III (B) skupino.
v Serum I (0), II (A), III (B) skupine dajejo pozitivno reakcijo v obeh serijah. Krv pripada skupini IV (AB). Toda pred takšnim zaključkom je treba izvesti isohemaglutinacijsko reakcijo s standardnim serumom IV (AB) skupine z uporabo istega postopka. Negativni izohemaglutinacijski test omogoča, da se testna kri končno dodeli skupini IV (AB).
2. Koncept Rh faktorja.
V eritrocitih smo našli še en antigen (aglutinogen), ki smo ga imenovali Rh faktor. Vsi ljudje so razdeljeni na posameznike z Rh-pozitivno (Rh +) in Rh-negativno (Rh) kri. Ugotovljeno je bilo, da 85% ljudi v eritrocitih vsebuje faktor Rh, tj. Njihova kri je Rh pozitivna, 15% pa jih ne vsebuje, tj. Kri teh ljudi je Rh negativna. Pri faktorju Rh (Rh-antigen) v krvi običajno ni nobenega anti-Rh-aglutinina (pripravljenih protiteles). Takšna protitelesa se pojavijo v krvnem serumu le kot posledica imunizacije osebe z Rh negativno kri z Rh-pozitivnimi rdečimi krvnimi celicami. Takšna imunizacija se pojavi zaradi ponavljajočih se transfuzij Rh-pozitivne krvi na Rh-negativnega prejemnika ali med nosečnostjo ženske z Rh-negativno Rh pozitivno kri. Tako cepljeni, postanejo ljudje senzibilizirani: ko se transfuzijo s Rh pozitivno krvjo, se razvije resen zaplet - pretok krvi zaradi transfuzije.
Štetje števila levkocitov in krvnih ploščic
Dejavniki, ki vplivajo na pravilnost študije belih krvnih celic
- dolgotrajno shranjevanje krvi pri sobni temperaturi
Norme vsebnosti levkocitov v krvi
Starost Število levkocitov
- 1 dan 11,6 - 22,0
- 1 teden 8.1.- 14.3
- 1 mesec 7,6 - 12,4
- Odrasli 4.0 - 9.0
Metode za določanje števila levkocitov v krvi.
- Štetje števila levkocitov v komori za štetje
- Štetje levkocitov v hematoloških analizatorjih
Določanje števila levkocitov v komori za štetje.
- Štetje levkocitov pod mikroskopom se izvede po liziranju rdečih krvnih celic v 100 velikih kvadratih mreže za štetje in ponovno izračuna za 1 liter krvi, glede na volumen kvadratov in razredčitev krvi. Število levkocitov je treba vzeti v 2-4 urah po odvzemu krvi.
- Če so v periferni krvi prisotne rdeče krvne celice, se ne lizirajo in preštejejo skupaj z levkociti. V tem primeru se za določitev pravega števila levkocitov odšteje število celic v rdeči vrstici od skupnega števila preštetih celic.
- Na primer: Skupno število levkocitov v izračunu v komori (ali analizatorju) -45x109 / l. Pri izračunu levkocitne formule je bilo ugotovljeno, da je prisotnih 50 eritroblastov (normoblastov) na 100 levkocitov.
Izračunamo pravo število levkocitov v krvi:
150 celic - 45 x 109 / l
100 celic (levkociti) - X
X = 100x45x10 / l / 150 = 30x10 / l
Tako je dejansko število levkocitov v krvi 30 x 109 / l.
Glavni viri napak pri izračunu levkocitov v komori:
- Nepravilen delež volumnov krvi in ocetne kisline, vzetih v epruveti.
- Nepravilno pripravljena raztopina ocetne kisline (pri koncentraciji več kot 5%, lahko nekateri levkociti, kar bo pripeljalo do podcenjevanja rezultata).
- Dolgotrajna izpostavljenost vzorca pri temperaturah nad 28 ° C, ki lahko pospeši lizo levkocitov v vzorcu in povzroči podcenjevanje rezultata.
- Nepravilno polnjenje komore Goryaev. Kot pri izračunu rdečih krvnih celic, je treba fotoaparat pustiti 1 minuto, da se celice usedejo.
- Kamera Goryaev po predhodni definiciji ni bila dovolj dobro oprana. Leukociti, ki ostanejo v komori, lahko precenjujejo rezultate analize.
Metode štetja trombocitov
- v komori za štetje
Vsaka skupina metod ima prednosti in slabosti.
- Štetje trombocitov v komori je dovolj natančno, ne zahteva izračuna števila rdečih krvnih celic. Po drugi strani pa je ta metoda bolj zahtevna, saj so trombociti v naravni obliki predstavljeni z majhnimi in slabo kontrastnimi elementi. Pomanjkljivost metode je štetje trombocitov v naslednjih urah po jemanju krvi.
- Določanje števila trombocitov v krvnih razmazih je po svoji natančnosti bistveno slabše od komorne metode ali avtomatskih števcev. Napake pri štetju krvnih madežev so lahko posledica slabe kakovosti brisa in s tem povezane neenakomerne porazdelitve trombocitov, netočne določitve števila rdečih krvnih celic. Pomembna pomanjkljivost metode je potreba po hkratnem štetju trombocitov in rdečih krvnih celic v krvi. Prednost tega je sposobnost študija trombocitov v vsakem trenutku, ne glede na čas odvzema krvi.
- Metoda določanja trombocitov z uporabo hematološkega analizatorja vam omogoča natančno določanje števila trombocitov, njihovega povprečnega volumna in porazdelitve po prostornini.
Enotna metoda štetja števila krvnih levkocitov v komori za štetje;
Metode za štetje števila levkocitov v krvi
Unified 2 metode za določanje števila levkocitov v krvi:
- v komori za štetje;
- z uporabo hematoloških analizatorjev.
Leukociti se preštejejo pod mikroskopom v določenem volumnu števne komore s konstantnim redčenjem krvi po uničenju rdečih krvnih celic.
Reagent: 3-5% raztopina ocetne kisline, obarvana z vodno raztopino metilen modre barve, ki obarva jedra levkocitov in olajša njihovo štetje. Raztopina je modre barve, stabilna pri skladiščenju.
Posebna oprema: mikroskop, štetna komora Goryaeva.
Potek odločnosti. S pomočjo merilne pipete ali avtomatskega razpršilnika vlijemo točno 0,4 ml raztopine ocetne kisline v epruveto za aglutinacijo in dodamo 0,02 ml (Sali kapilar) krvi. Kapilaro večkrat speremo s kislo raztopino in premešamo vsebino epruvete. To povzroči 20-kratno redčenje krvi. Pustite do štetja, vendar ne več kot 2-4 ure po odvzemu krvi. Komora Goryaev je pripravljena za delo tako, da obrišete pokrivno steklo, tako da se pojavijo mavrični obroči. Še enkrat temeljito pretresite vsebino epruvete in napolnite komoro Goryaev s to mešanico z uporabo Pasteurjeve pipete ali steklene palice z raztopljenim koncem. Polnjeno komoro za štetje pustite 1 minuto v vodoravnem položaju za sedimentacijo levkocitov. Leukociti se štejejo v 100 velikih nečrtanih kvadratih komore za štetje pod pogoji: kondenzator se spusti, okular 10x ali 15x, leča 8x. Štetje se začne od zgornjega levega kota Goryaevovega omrežja. Pri štetju levkocitov sledijo pravilu: preštejejo se vse celice znotraj kvadrata in na razmejitvenih črtah, če večinoma gredo znotraj kvadrata. Celice, ki jih presekajo ločilne črte točno na polovici, se štejejo samo na dveh straneh kvadrata (na primer levo in zgoraj).
Izračun Pri izračunu števila levkocitov v 1 μl krvi uporabite formulo:
- število levkocitov v 1 ml krvi;
a - število levkocitov, izračunano v 100 velikih kvadratih;
4000 - faktor pretvorbe volumna do 1 µl glede na prostornino majhnega kvadrata, ki je µl;
1600 - število preštetih majhnih kvadratov;
20 - redčenje krvi.
Za pretvorbo števila levkocitov v enotah SI (v 1 l krvi) se dobljena vrednost pomnoži z 10 6.
Praktično za določanje vsebnosti levkocitov v 1 l krvi se število levkocitov, izračunano na 100 velikih kvadratih v komori za štetje, pomnoži s 50, deljeno s 1000 (to pomeni, da se tri znake na levi prenesejo v vejico) in pomnožimo z 10 9.
Metode štetja levkocitov v komori Goryaev, norme indikatorjev in odstopanja
Goryjeva komora je naprava za merjenje števila celic in delcev v določenem volumnu tekočine (kri, urin), sestavljena iz posebnega debelega predmeta in pokrivnega stekla.
Stekleni tobogan ima v sredini vdolbeno območje, na katerem se uporablja mreža 225 velikih kvadratov. Od teh kvadratkov je 25 enakomerno razdeljenih na 16 manjših kvadratov. Zaradi te prostornine se izračun izvaja natančneje kot pri drugih ročnih števnih napravah.
Storitev kamere
Po uporabi instrumenta drsnik razkužimo z potopitvijo v 4-odstotno raztopino formalina za eno uro ali v 70-odstotni raztopini etanola pol ure. Nato se komora temeljito opere z destilirano vodo. Odvečna tekočina se odstrani z mehko krpo. To je vredno pozoren na dejstvo, da fotoaparat ni mogoče obrisati z bombažno palčko zaradi vlaken oklepa. Shranjeno steklo na suhem mestu.
Med uporabo fotoaparata se izračunavajo PE, ki se nahajajo znotraj kvadrata mreže in na zgornji in levi črti njegovega oboda. V tem primeru delci, ki se med izračunom te celice dotaknejo desne in spodnje črte oboda, niso vključeni.
Določanje levkocitov v krvi
Metoda štetja levkocitov
Izračun števila levkocitov se začne z redčenjem krvi v 3-5% raztopini etanojske kisline z 20-kratno metil-modro. Delovni material pred uporabo obrišite z gazo.
Pokrovno steklo je treba obrisati pred pojavom Newtonovih obarvanih obročev. Nato se komora napolni z razredčeno kri, medtem ko se prve dve kapljici sprostita na filtrirni papir. Tekočina vstopi v komoro zaradi kapilarne lastnosti vode. Pomembno je zagotoviti, da se pri polnjenju nič ne pretaka v utore. Če se to zgodi, se tekočina nežno odstrani s filtrirnim papirjem. Nato pustite mrežo samo za minuto in počakajte, da se FE ustavi.
Število belih krvnih celic se izvaja v sto velikih kvadratih pri majhni povečavi, to je z okularjem 10x in objektivnim 8x, v skladu z Egorovim pravilom. Dobljena številka se uporablja v formuli.
X = (n × 250 × 20) / 100 ali X = n × 50
X - število levkocitov.
n je število, dobljeno s štetjem v komori.
Določimo število levkocitov ob upoštevanju števila velikih kvadratov mreže - 100 in razredčitve krvi - 20.
Kako je število levkocitov
Stopnja levkocitov in nepravilnosti
Stopnja levkocitov pri ljudeh je 4,0 - 9,0 × 10⁹ / l. Drugače pa je približno 1 000 belih krvnih celic lociranih v 1 kubičnih mm krvi.
Zunanji fiziološki dejavniki lahko vplivajo na odstopanja od norme:
- vnos hrane pred darovanjem krvi;
- stres;
- nosečnost ali menstruacija pri ženskah;
- hipotermija ali pregrevanje;
- velik fizični napor pred testiranjem.
Če število belih krvničk preseže 9,0 × 10⁹ / l (levkociti so povišani), se to stanje imenuje levkocitoza. Podobno sliko lahko opazimo pri malignih boleznih krvi, okužbah, radioaktivnih poškodbah in zastrupitvah.
Zdravila lahko povečajo tudi število levkocitov. Nekroza tkiv, močne krvavitve, vključno z operacijami, ledvična koma, srčna bolezen - vse to lahko privede do levkocitoze.
Padec števila levkocitov pod 3,9 × 10⁹ / l se imenuje levkopenija. Vendar pa je pri nekaterih ljudeh določeno število levkocitov določeno na 3,5 × 10 l / l. Menijo, da takšni ljudje ohranjajo rezerve teh celic v tkivih 50-krat več kot v krvi. Po aplikaciji analgetikov, sulfonamidov in drugih zdravil se po dolgem mišičnem delu zaradi okužbe in virusov (tifus, gripa in ošpic) pojavlja tudi funkcionalna levkopenija.
Formula levkocitov
Vse vrste levkocitov tvorijo levkocitno formulo. Na njem lahko prepoznate določene patologije. Norme formule se razlikujejo glede na starost in obdobje življenja osebe. Premik je jasno viden pri ženskah med nosečnostjo ali po porodu.
Za izračun razmerja med tipi teh celic se uporabljajo različne metode, vse pa so povezane z dejstvom, da so težje celice (npr. Bazofili) bližje robu brisa in da so limfociti, kot svetlobne celice, ostali na sredini.
- Metoda Filipchenko. Pri tej metodi se izračun opravi vzdolž prečne ravne črte meje od enega konca do drugega. Možganska kap je psihično razdeljena na tri dele.
- Schillingova metoda. Levkociti se štejejo na štiri dele brisa.
Dobljeni podatki so prikazani v tabeli. Število posameznih vrst belih krvnih celic se izračuna po formulah. Označeni elementi, ki so se pojavili. Rezultat se ohrani do trenutka, dokler ni vsota vseh preštetih celic 100.
Metode za štetje levkocitov v urinu
V urinu se izračuna število levkocitov v celici Goryaeva Nechiporenko. Ta analiza je potrebna za spremljanje bolezni ledvic. Periodični pregled urina pomaga spremljati pravilnost zdravljenja in učinkovitost predpisanega zdravljenja.
Zbiranje urina
V študiji je le prvi jutranji urin sredi uriniranja. Pomembno je, da bolnik upošteva osnovna pravila za zbiranje tega biomateriala. Posebno dodatno usposabljanje za študij ni potrebno.
Metoda izračuna
10 ml sveže zbranega urina centrifugiramo tri minute pri 2,5 tisočih vrtljajih na minuto. Pred tem je treba zagotoviti, da ima urin, da bi se izognili delni razgradnji celic, šibko kislinsko reakcijo.
S pipeto z ozkim, vlečenim koncem odstranite zgornjo plast. In vitro pustite 0,5 ml urina na 1 ml, odvisno od volumna usedline.
Oborino previdno zmešamo s supernatantom. Nastala raztopina se uporablja za zapolnitev Goryaevove števne komore po podobnem principu, ki se uporablja pri izračunu PV krvi. Fotoaparat ostane sam za 3 do 5 minut.
Bele krvne celice je treba prešteti v velike kvadrate po celotni rešetki s 7-kratnim okularjem in 40-kratno lečo.
Dobljena številka se uporablja v formuli:
X = (a / 0,9) × (1000 / V)
X - število levkocitov v 1 ml urina.
a - izračunana količina deljena z volumnom komore v 1 μl usedline urina.
v - Količina urina, vzeta za študijo.
1000 - količina usedline.
To je pomembno! Norma levkocitov: v 1 ml urina ni več kot 2 × 10³ belih krvnih celic.
Število levkocitov v krvi
Osebje laboratorija za ugotavljanje števila levkocitov v krvi najpogosteje uporablja komoro Goryaev. Štetje levkocitov v komori Goryaev je manj natančna metoda kot določanje levkocitov z uporabo elektronskih naprav. Velikost napake je ± 7%.
Kako se šteje štetje
- V epruveto vlijemo 0,4 mililitre razredčilne tekočine in 0,02 mililitra kapilarne krvi. Pripravljena vzreja je enaka 1:20.
- Kot razredčilna tekočina se običajno uporablja 3 ali 5% raztopina ocetne kisline. Prednastavljen je z metilensko modro, ki z reakcijo obarva jedra levkocitov.
- Pred polnjenjem komore se Goryaev cev čim bolj temeljito stresa. Polnjenje kamere je enako kot za štetje rdečih krvnih celic.
Funkcije izračuna
S številom levkocitov, ki so bistveno slabši od rdečih krvnih celic, je izračun narejen v 100 velikih kvadratih. V 100 kvadratih je bilo izračunano število levkocitov.
Z volumnom majhnega kvadrata 14.000 kubičnih milimetrov in 20-kratnim redčenjem v krvi se število levkocitov izračuna na naslednji način: 4000 x 20 in nato razdeli na 1600. Izkazalo se je, da je 1/2 x a.
Za izračun števila belih krvnih celic v 1 µl je treba izračunano število deliti z 2 in dodati še dve ničli.
Odstopanje levkocitov od nivoja kaže na levkocitozo in levkopenijo ter zahteva takojšnjo podrobno preiskavo, saj obstaja velika verjetnost za prisotnost tuberkuloze, pljučnice, sepse, tifusa, radiacijske bolezni.