Kvalitativna analiza PCR za hepatitis C

Hepatitis je resna bolezen, ki ima veliko vzrokov. Osnova za njegov razvoj je neposredna ali posredna škoda na jetrih. Glede na njegov pomen za celoten organizem je mogoče le ugibati, kako težko je patologija. V tem članku bomo podrobneje preučili značilnosti tečaja in laboratorijske diagnoze hepatitisa C. t

Vzrok bolezni je virusno sredstvo, ki se nanaša na patogene, ki vsebujejo RNA. Ima značilno lastnost - sposobnost mutiranja, to je, da spremeni svojo strukturo. Zaradi tega se okužba izogne ​​napadu imunskega sistema in v večini primerov povzroči kronično vnetje v jetrih.

Glede na obstoj različnih podtipov virusa mora izbor zdravil temeljiti na rezultatih genotipizacije. Kljub dolgi raziskavi o bolezni in značilnostih strukture HCV še ni bilo mogoče razviti specifičnega cepiva za to bolezen.

Težave z zgodnjo diagnozo so v asimptomatskem poteku hepatitisa, zaradi česar oseba obišče zdravnika v fazi ciroze. Za pravočasno zaznavanje bolezni so potrebni redni zdravstveni pregledi. Le z laboratorijskimi preiskavami krvi je mogoče odkriti HCV in preprečiti okužbo ljudi okoli vas. Dejstvo je, da lahko nosilec okužbe dolgo časa ne ugiba o patologiji in še naprej posreduje virus zdravim ljudem.

Načini prenosa

V večini primerov se virus širi skozi kri, saj vsebuje najvišjo koncentracijo patogenih povzročiteljev. Tako se okužba prenaša:

• s hemodializo;
• z okuženo iglo;
• v procesu spopadov, ko je koža poškodovana in pride do stika s krvjo;
• transfuzijo krvi (transfuzija krvi).

Verjetnost okužbe med intimnostjo je zanemarljiva, saj je v spermi in vaginalnem izcedku majhno število patogenov. Tveganje za okužbo se znatno poveča zaradi kršitve integritete sluznice genitalij. To opažamo pri agresivnem in analnem seksu.

Kar se tiče vertikalnega načina prenosa, se izvaja v procesu dela. V obdobju gestacije ploda patogen ne more prodreti skozi placento do zarodka. Pri naravnem rojstvu se patogeni povzročitelj prenese na otroka s traumatizacijo kože, ko opazimo stik z materino krvjo.

Po prodoru patogena v zdrav organizem se začne sinteza protiteles, ki so zaščitena pred okužbo in pripadajo imunskim strukturam. Najdemo jih v začetni študiji osebe, ki uporablja ELISA.

Za potrditev diagnoze je bolnik izpostavljen verižni reakciji s polimerazo. Gre za analizo genskega materiala patogenega povzročitelja in določitev virusne obremenitve.

Laboratorijska diagnoza hepatitisa C

Laboratorijska diagnoza se začne z imunskim testom encima. Njegova glavna naloga je odkriti protitelesa, ki se tvorijo proti patogenu. Njegova učinkovitost je skoraj 95%. Zahvaljujoč tej raziskavi je možno identificirati nosilca virusa v predklinični fazi in ga poslati v nadaljnji pregled.

Kvalitativna analiza ELISA kaže na prisotnost ali odsotnost imunoglobulinov v krvi pacienta. Njegov rezultat je lahko "pozitiven" ali "negativen". Po prejemu prvega odgovora se oseba pošlje na naslednji pregled - PCR. Njegova cena je odvisna od kakovosti reagentov in laboratorija. Stroški verižne reakcije polimeraze lahko dosežejo 4 tisoč rubljev.

Značilnosti PCR

Z uporabo verižne reakcije s polimerazo nam celo majhna količina biološkega materiala omogoča oceno virusne obremenitve v krvi, tj. Za izračun koncentracije patogenov v enem mililitru tekočine.

S prihodom PCR je diagnoza hepatitisa postala veliko lažja. Analiza omogoča identifikacijo HCV RNA, ugotavljanje stopnje infekcijskega procesa in nalezljivosti nosilca virusa.

Obstaja več vrst genetske diagnoze:

1. Kvalitativna analiza PCR za hepatitis C - potrjuje prisotnost ali odsotnost HCV v krvi osebe:
2. kvantitativno, s pomočjo katerega lahko izračunate koncentracijo virusov in ugotovite stopnjo bolezni. Rezultat je podan v ie / ml ali kopijah / ml (odvisno od laboratorija);
3. genotipizacija - potrebna za določitev genotipa HCV. To je potrebno za natančno izbiro zdravil, ki bodo v tem primeru najbolj učinkovita. Analiza posredno kaže na resnost patološkega procesa v jetrih. Tako se pri tretjem genotipu patogena najpogosteje opazi steatoza, na podlagi katere se kopiči maščoba v hepatocitih (njenih celicah). Poleg tega vrsta virusa vpliva na izid in trajanje terapevtskega poteka.

Kvalitativna analiza PCR za hepatitis C

Najprej se v laboratoriju preveri biološki material za prisotnost HCV RNA. Pomembno je vedeti, da ima kvalitativna analiza hepatitisa C določeno stopnjo občutljivosti in zato morda ne daje vedno pravilnega odgovora. V tem primeru je priporočljivo ponovno izvesti laboratorijsko diagnostiko z uporabo drugih reagentov.

Za pridobitev zanesljivih rezultatov je treba uporabiti preskusne sisteme z občutljivostjo vsaj 50 ie / ml.

Diagnostični rezultat je lahko „pozitiven“ ali „negativen“. Če patogena ni v krvi, je študija zaključena. Če se v vzorcu odkrije patogeno sredstvo, se količinsko ovrednoti virusna obremenitev.

Ko je proces kršen, dobimo lažno negativni odziv, na primer aktivne sestavine, ki zavirajo konstrukcijo kopij patogena, vstopijo v medij. Tako ni mogoče prikazati prave krvne slike, zato okužba osebe ni diagnosticirana.

Če je cev za zbiranje biološkega materiala in okolje za študijo onesnažena, lahko dobimo lažen pozitivni rezultat. Poleg tega je taka reakcija analize možna pri mešanih okužbah, kadar jetra prizadenejo številni virusi, na primer hepatitis C in D. t

Indikacije za kvalitativne raziskave

Zdravnik lahko bolniku predpiše kvalitativno študijo o identifikaciji RNA virusa hepatitisa C:

• po prejemu pozitivnega ali dvomljivega odziva encimskega imunskega preskusa;
• za preverjanje diagnoze;
• določitev virusne obremenitve;
• določanje stopnje bolezni;
• diagnozo mešane okužbe. Hepatitis C pogosto okuži jetra hkrati z virusom "D";
• določanje terapevtske taktike ob upoštevanju genotipa povzročitelja;
• ocenjevanje dinamike sprememb med zdravljenjem z protivirusnimi zdravili.

Prednosti verižne reakcije s polimerazo vključujejo:

1. visoka občutljivost tehnike, ki omogoča ugotovitev dejstva okužbe v predklinični fazi;
2. identifikacijo genskega materiala patogena in ne njegovih protiteles;
3. možnost določitve podtipa patogenega povzročitelja;
4. visoka stopnja diagnosticiranja, saj se ne zahteva sejanje materiala na hranilnem mediju in zadostuje uporaba posebnih preskusnih sistemov. Oseba dobi rezultat po 5 urah;
5. vsestranskost. Analiza omogoča identifikacijo genskega materiala (RNA, DNA). Zaradi tega lahko zdravnik potrdi hepatitis C in druge vrste bolezni (B);
6. sposobnost zaznavanja latentne okužbe.

Kvantitativne raziskave

V študiji krvi z uporabo polimerazne verižne reakcije lahko izračunamo število patogenov v fiksni količini biološkega materiala. Kazalec je prikazan v ie / ml. S pomočjo analize je mogoče določiti stopnjo okužbe bolnika, določiti stopnjo infekcijskega procesa in oceniti učinkovitost zdravljenja z zdravili.

Na podlagi PCR strokovnjak odloči, katere odmerke zdravil lahko blokira reprodukcijo patogenov. Poleg tega se določita trajanje protivirusnega zdravljenja in napoved življenja. Pomembno je vedeti, da imajo testni sistemi visoko občutljivost, zato metoda omogoča potrditev okužbe osebe v predklinični fazi.

Genotipizacija

Glede na sposobnost patogena, da mutira, je njegov genotip potreben za določitev taktike zdravljenja in izbire protivirusnih zdravil. Na primer, zdravljenje HCV 1 traja 48 tednov, pozitivni trend pa je opažen le v 60% primerov. Genotipi 2 in 3 imata ugodnejšo prognozo. Protivirusna zdravila so predpisana 8 mesecev, njihova učinkovitost pa 85%.

Po statističnih podatkih so v večini primerov HCV 1, 2 in 3 registrirani v Ruski federaciji.

Pri dešifriranju laboratorijskega testa se lahko ta odgovor navede - "ni vneseno". To pomeni, da virus kroži v bolnikovem obtočnem sistemu in ga testni sistem ne more prepoznati. Rezultat analize v tem primeru kaže, da patogen ni značilen za določeno geografsko območje.

Kako pridobiti zanesljive rezultate?

Da bi kvalitativna študija PCR za odkrivanje RNA povzročitelja hepatitisa C pokazala pravilne rezultate, je treba upoštevati zahteve za pripravo za laboratorijsko diagnostiko:

1. odvzem vzorcev krvi je na prazen želodec, "lačna" vrzel pa ne sme biti krajša od 8 ur;
2. dva dni pred študijo je priporočljivo prenehati jemati alkoholne pijače in opustiti začinjene, mastne in prekajene jedi;
3. preklicati uvedbo zdravil, ki zmanjšujejo strjevanje krvi, na primer heparin. Če so ta zdravila predpisana iz zdravstvenih razlogov, morate o tem obvestiti zdravnika. Poleg tega se mora strokovnjak zavedati sprejemanja drugih zdravil, ki lahko vplivajo na rezultate laboratorijskih raziskav;
4. Na predvečer zbiranja biološkega materiala ne bi smeli izvajati fizioterapevtskih postopkov, ki bi morali biti izpostavljeni hudim fizičnim naporom.

Na rezultate analize lahko vpliva ne le oseba, ki daje kri, temveč tudi drugi dejavniki, in sicer:

• vzorčenje krvi slabe kakovosti;
• nespoštovanje priporočil o prevozu biološkega materiala;
• nezadostno usposabljanje laboratorijskih delavcev;
• neskladnost z raziskovalno tehniko;
• uvedba antikoagulantov (heparin) na predvečer vzorčenja krvi. Ta skupina zdravil zmanjšuje strjevanje in s tem upočasnjuje delo z reagenti.

V različnih laboratorijih se lahko diagnostični odziv rahlo razlikuje, vendar te napake ne vplivajo na končni rezultat študije.

Posebna pozornost je namenjena vrstam preskusnih sistemov, ki se uporabljajo v laboratoriju. Pogosto imajo prednost reagenti z visoko občutljivostjo. To je pomembno za bolnike z nizko virusno obremenitvijo, ker jih je težko odkriti.

Kako pogosto se izvaja laboratorijski test?

Primarno polimerazno verižno reakcijo izvajamo pri ljudeh, ki so bili z imunoanalizo odkriti protitelesa proti patogenu hepatitisa. V tem primeru je dodeljeno, da potrdi dejstvo okužbe osebe in ugotovi stopnjo bolezni. Poleg tega analiza omogoča določitev podtipa virusa, kar je še posebej pomembno za izbiro zdravil.

Naslednje obdobje obveznega laboratorijskega testiranja je 3 mesece od začetka protivirusnega zdravljenja. Diagnostika omogoča oceno učinkovitosti zdravil, prilagoditev odmerka ali njihovo nadomestitev.

Poleg osnovnih testov se lahko PCR opravi še 4 in 24 tednov od začetka zdravljenja. Pozitivno prognozo bolezni potrjuje zmanjšanje virusne obremenitve po treh mesecih zdravljenja. Na primer, zmanjšati naj bi se z 1 milijona ie / ml na več sto tisoč.

Če koncentracija patogenov v krvi ostane na enaki ravni ali se rahlo poveča, to kaže na neučinkovitost protivirusnih zdravil in zahteva njihovo nadomestitev. Z uporabo PCR na koncu zdravljenja je mogoče potrditi bolnikovo okrevanje.

Za pravilno interpretacijo rezultatov laboratorijske diagnostike je potrebno posvetovanje s hepatologom ali specialistom za nalezljive bolezni. Glede na visoko pogostost napačnih odgovorov pri testu ELISA se analiza uporablja izključno za primarni presejalni test. Za temeljitejšo preiskavo bolnika je uporabljena verižna reakcija s polimerazo.

Pro analiza PCR za virus hepatitisa C

Hepatitis C je resna bolezen jeter za vsako osebo. Patologijo povzroča flavivirus HCV, v strukturi katerega je prisotna RNA molekula, ki nosi splošno genetsko kodo virusa.

Patologija je lahko različnih oblik, vse je neposredno odvisno od splošnega stanja osebe in značilnosti vsakega posameznega organizma.

Ta struktura omogoča analizo PCR za prisotnost virusa hepatitisa C v telesu.

Omogoča vam, da pravočasno prepoznate virus, ki je nevaren za ljudi, opravite zdravljenje z drogami in obnovite zdravje, ki ščiti telo pred uničenjem jeter.

Virus HCV se lahko manifestira tako v akutno nevarni obliki kot v kronični obliki. Če je oseba naenkrat ali drugače odkrila ta virus, mora biti dodeljena PCR analizi.

Zakaj se opravi analiza PCR?

Na podlagi rezultatov analize bo zdravnik lahko pripravil shemo zdravljenja.

Laboratorijska medicinska analiza PCR za hepatitis C je študija biološkega materiala za določanje flavavirusa. Študija predstavlja verižno reakcijo s polimerazo.

Prikazuje skupno kvantitativno vrednost virusne lezije, njene kvalitativne lastnosti in možno je določiti tudi genotip virusa, ki vsebuje RNA.

Pomembno je! Na podlagi te analize zdravnik določi metodo, vrsto terapije in njeno trajanje. Z analizo je mogoče določiti tudi splošni epidemiološki dejavnik, tj. Stopnjo tveganja za prenos bolezni na druge nosilce.

Analiza v sodobni medicini se imenuje tudi analiza RNA. Razlog je, da je lastnost flavavirusa hepatitisa C sestavljena iz delca RNA, katerega velikost je približno 30-60 nm. Ena od značilnosti tega virusa je določena nagnjenost k mutaciji.

Vsaka podvrsta ali prisotna genotip ima različno odpornost. Ta okoliščina postane podlaga za različne metode raziskovanja in zdravljenja bolezni ter nadaljnjo prognozo z dobro opravljeno terapijo.

Kako

Analiza se izvaja strogo na prazen želodec, kar pomeni, da se venska kri daje pred zajtrkom. Metoda testiranja se izvaja s pomočjo PCR v realnem času ali zelo občutljiva s sodobno diagnostiko standardov, ki se izvaja v realnem času.

Spodnja meja detekcije v tem primeru je 15 ie / ml. Analiza se izvaja strogo z uporabo zaprtih avtomatiziranih sistemov. Hepatitis C je mogoče določiti z uporabo testov, kot je COBAS AMPLICOR s splošno občutljivostjo 50-100 IU / ml.

Pomembno je! Vse vrste podobnih sodobnih laboratorijskih raziskav se izvajajo na podlagi upoštevanja določenega praga občutljivosti.

Govorimo o sposobnosti reagenta, ki se uporablja za zaznavanje minimalne ravni sposobnosti reagenta za določanje virusa v biološkem materialu, ki ga proučujemo. Če v telesu ni bolezni, bo rezultat študije videti, kot da »ni mogoče najti«.

Slika prikazuje PCR analizno vezje:

Vrste PCR analize in njeni rezultati

Če imate najmanjše težave in bolečine na področju piškotkov, se morate takoj posvetovati z zdravnikom, ki bo opravil temeljito študijo. Analiza PCR za hepatitis C temelji na treh glavnih točkah:

1. Kvantitativna analiza.
2. Kvalitativna analiza.
3. Genotipizacija

Opravljeni preskusi omogočajo določitev in določitev natančne narave viremije in različnih simptomov genetskega načrta prisotnosti patogena. V neposrednem sorazmerju z občutljivostjo, ki jo opravi diagnostični sistem, je mogoče enkratno opraviti medicinske raziskave in nekatere potrditve.

To je treba storiti, da se pojasnijo predhodno pridobljeni rezultati, in se v tem primeru uporablja bolj občutljiv reagent.

Visoka kakovost PCR

Kvalitativna analiza za PCR je drugo ime za študijo, kot je verižna reakcija s polimerazo. S standardno občutljivostjo testa, ki omogoča določanje prisotnosti virusnega mikroba, bodo kazalniki v območju 10-500 ie / ml.

Z negativno analizo bolezni bo analiza pokazala, da bo skupna koncentracija v krvi pacienta za red velikosti nižja od splošnega praga občutljivosti za diagnostični sistem.

Če je bil med kakovostno PCR dosežen odziv, ki ni bil odkrit, je treba za nadaljnjo obdelavo poznati skupni prag občutljivosti reagenta. Kar se tiče pozitivnega odziva, se lahko med analizo PCR doseže že 4. dan po okužbi. Standardne beljakovinske frakcije do ugotovljenih flavavirusov se lahko pojavijo veliko kasneje.

Splošna shema PCR analiz se lahko prikaže na naslednji način:

Kvantitativna PCR

Kvantitativna PCR je poseben pokazatelj proizvedene virusne obremenitve, ki odraža splošno raven koncentracije virusne RNA v človeškem telesu. Ta kazalnik prikazuje količino virusnih RNA encimov, ki so prisotni na kubični centimeter, vzet iz krvne žile.

Rezultati te študije v sistemu medicinskih raziskav so označeni v enotah enega mililitra. Pri potrdilih, izdanih v rokah, je ta kazalnik lahko videti 1,7 milijona ali 1.700.000 IU / ml.

Kvantitativna PCR analiza je bila dodeljena tem bolnikom pred izvajanjem protivirusne terapije. Drugi čas je na 12. tednu zdravljenja, ki vam omogoča, da pravilno ocenite rezultate zdravljenja s hepatitisom C. Z drugimi besedami, analiza omogoča določitev pomembnih parametrov, kot so:

1. Določena je stopnja infektivnosti, tj. Stopnja tveganja za prenos mikrobov iz okužene osebe na zdravo osebo. Višja kot je koncentracija flavivirusa RNA, večja je verjetnost okužbe druge osebe, kar je pomembno v spolnih odnosih.
2. Splošna raven učinkovitosti in izbrana metoda zdravljenja.
3. To je idealna priložnost za določitev trajanja in prognoze protivirusnega zdravljenja. Praviloma, večja je obremenitev, daljša bo obdelava.

Treba je vedeti, da je kvantitativna PCR odvisna od posebne vrste laboratorijskega testa in od praga občutljivosti. Najnižja meja uveljavljenega standarda je indikator, ki ne dosega 600.000 IU / ml.

Povprečje je v razponu od 600.000 do 700.000 ie / ml. Če so bili rezultati doseženi nad 800 000 ie / ml, zdravnik takoj ugotovi visoko koncentracijo snovi, kot je RNA, z virusom, ki je prisoten v sestavku.

Pomembno je! Neposredna povezava med nivojem HCV RNA in resnostjo bolezni kaže, da je ta virus prisoten v splošni krvni sestavi, in ugotavlja tudi kompleksnost patologije. Bolnik ima lahko dovolj visoko virusno obremenitev. Poleg tega to razmerje kaže, da so celice precej resno poškodovane.

Genotipizacija

Zaradi relativno visoke mutacijske aktivnosti HCV v naravi je med opravljenim testiranjem mogoče ugotoviti, kako je vrsta virusa prisotna v krvi bolne osebe. V sodobni medicini je znanih 11 genotipov virusa, kot je hepatitis C. Vključuje precej veliko število različnih podvrst ali podtipov.

Tipi 1,2 in 3 so znani in običajni v Rusiji, na splošno pa je genotipizacija zelo pomemben element opravljene analize. Z njim zdravnik razume stopnjo odpornosti ali odpornosti patologije na izbrana zdravila.

Skoraj vedno, na podlagi te analize, se gradi prihodnje zdravljenje. To je pomembno, ker obstajajo pravila zdravljenja, kot so:

Kvalitativna analiza za hepatitis C

8. marec 2017, 12:29 Strokovni članki: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10,547

Kvalitativna analiza verižne reakcije s polimerazo - PCR za hepatitis C določa prisotnost ali odsotnost HCV v telesu. V laboratorijskih pogojih je raziskana struktura RNA, ki bo vključevala virus. V primeru odkritja virusa C je treba opraviti postopek zdravljenja, saj bo zapostavljeno stanje jeter povzročilo hude posledice. Po obnovitvi se izvede visokokakovostna PCR, da se potrdi odsotnost protiteles. Imenovan in za redne preglede. Z nizko koncentracijo povzročitelja v krvi PCR (kvalitativna) morda ne zazna ničesar, ker ima diagnostični sistem lastne pragove občutljivosti. V primeru začetne stopnje bolezni ali blage oblike, PCR opravimo z ultradiagnostiko na ultra občutljivi opremi.

Kaj je RNA virus?

Izraz RNA virusa hepatitisa C (ali RNA virusa hepatitisa C) je sama bolezen jeter. Virus C se veže na zdravo celico telesa s penetracijo v notranjost. Sčasoma, razpršeno po telesu, je potrebno le priti v kri. Posledica tega je, da patogen prodre skozi jetra, se združi s celicami in trdo dela. Jetrne celice (hepatociti) delujejo pod njenim vplivom, se spreminjajo in s tem umirajo. Daljši je virus C v jetrih, večje je število celic. Sčasoma se razvijejo nevarne bolezni, ki vodijo v maligno degeneracijo in smrt.

Okužba jeter s to vrsto virusa se morda ne bo pojavila navzven. Že dolga leta ali desetletja se okužena oseba počuti popolnoma zdravo in le naključna preiskava najpogosteje razkriva patologijo. Pri dajanju krvi za hepatitis se preuči del verige RNA (ribonukleinske kisline), ki je del človeškega gena (DNA). Rezultati laboratorijskih preiskav se ne smejo uporabljati za samozdravljenje, ker je to le indikator. Natančno sliko in nadaljnjo diagnozo bolje določi zdravnik.

Ko končamo: indikacije za raziskave

V potrditev HCV se opravi PCR analiza (verižna reakcija s polimerazo). Študije PCR pomagajo najti povzročitelja v strukturi RNA in predpisujejo učinkovito zdravljenje. Imenovan v naslednjih primerih: t

• odkrivanje znakov vnetja jeter;
• presejalne študije za preprečevanje;
• pregled oseb v stiku;
• diagnozo hepatitisa mešanega izvora (določitev glavnega patogena);
• določanje stopnje reprodukcijske aktivnosti virusa v kronični obliki;
• ciroza jeter;
• za določitev učinkovitosti predpisanega zdravljenja.

Raziskave PCR predpisuje zdravnika, da določi učinkovitost poteka zdravljenja hepatitisa.

Obstaja kvalitativna in kvantitativna analiza PCR. Kvantitativna PCR prikazuje odstotek RNA z virusnimi nosilci v krvi in ​​kvalitativno kaže na prisotnost ali odsotnost virusa. Pozitiven kazalnik kakovosti (prisotnost RNA hepatitisa C) potrebuje tudi kvantitativno raziskovanje. Visoka koncentracija povzročitelja hepatitisa C je povezana s tveganjem prenosa, to je okužbo drugih. Nizke številke so boljše za zdravljenje. Količina RNA virusov v krvi ni povezana z intenzivnostjo bolezni. Analiza PCR poteka tudi v primeru interferonske terapije, da se predpiše trajanje in kompleksnost poteka zdravljenja.

Značilnosti visoko kakovostne PCR analize za hepatitis C

Kvalitativni analizi je dodeljen indikator verižne reakcije s polimerazo za vse bolnike, ki imajo v krvi protitelesa proti hepatitisu C. Tisti, ki so bili bolni in so se ozdravili, morajo ponovno opraviti test. Priporočljivo je, da se opravi analiza za hepatitis B, nato v primeru pozitivnega zaključka in za hepatitis D. Tudi kvalitativno analizirane reakcije je treba izvesti skupaj z drugimi krvnimi preiskavami. Analize bodo pokazale popolno sliko širjenja virusa.

Iz rezultatov testov bo viden ali negativen le pozitiven test za hepatitis C, tj. Prisotnost ali odsotnost virusa. Če je izhod "zaznan", je virus še vedno aktiven. Oznaka "ni odkrita" pomeni odsotnost virusa ali njegovo majhno količino. Pri tem kazalniku je treba upoštevati, da je analitična občutljivost diagnostičnih sistemov drugačna in da je lahko hepatitis C RNA še vedno v krvi, vendar v analizi ni izražen.

Posebej občutljiva metoda PCR razkriva ultra hepatitis C tudi v skromnih količinah. Uporabljena je študija fluorescenčne hibridizacije, ki je večkrat višja od standardnih PCR sistemov. Metoda se uporablja v več primerih:

• domnevne skrite oblike hepatitisa C;
• PCR diagnostika ni potrdila patogena, vendar obstajajo protitelesa;
• v primeru izterjave;
• za odkrivanje zgodnje okužbe.

Nazaj na kazalo

Analiza dekodiranja

PCR dekodiranje HCV vpliva na končno odločitev pri diagnozi, zlasti z ultrametodno metodo. Glavna pomanjkljivost te študije je strogo upoštevanje sterilnih pogojev za vzorec in materiale. Rahlo odstopanje včasih kaže netočne analitične zaključke, otežuje diagnozo in poznejše zdravljenje. Analiza PCR za določanje hepatitisa RNA ne kaže vedno samozavestno sliko bolezni, včasih so dovoljene netočnosti in v obeh smereh.

Pri diagnosticiranju virusa hepatitisa je priporočljivo uporabiti celovit pregled.

Norma kazalnikov

Odsotnost JgM protiteles proti virusnemu hepatitisu C v rezultatih študije velja za normo pri analizi verižne reakcije s polimerazo. Istočasno ugotovitve serološke analize kažejo na prisotnost protiteles proti virusu C in to je tudi v normalnih mejah. Kvalitativna opredelitev ne kaže intenzivnosti bolezni, ampak samo razkriva povzročitelja hepatitisa C v RNA. Ta analiza se ponovi po obdelavi, da se potrdi dejanski izkoristek.

Odstopanja

Če so prisotna JgM protitelesa proti HCV RNA, to kaže na razvoj okužbe. Bolezen hkrati poteka akutno ali kronično, manifestira se v različnih fazah. Če se zabeleži zmanjšanje števila protiteles, bo analiza pokazala, da so bili rezultati zdravljenja doseženi med obnovo. V diagnostiki so zelo redki primeri lažno pozitivnih ugotovitev. Najdemo jih pri ženskah med nosečnostjo in pri ljudeh z drugimi nalezljivimi boleznimi.

Analiza PCR za hepatitis C

Za diagnozo "kronični virusni hepatitis C (CVHS)" je potrebna celovita preiskava osebe, ki vključuje klinične, laboratorijske in instrumentalne študije. Z vidika diagnoze za pravilno diagnozo je pomembna metoda verižne reakcije PCR-polimeraze.

Kaj kaže ta analiza in zakaj je potrebna?

Ta laboratorijska metoda odkriva RNA virusa hepatitisa C v človeški krvi. Skupaj z encimsko vezanim imunskim testom (ELISA) za protitelesa proti virusu se PCR uporablja za diagnozo CVHC in njenega patogenega genotipa. Ta raziskava je ena najnovejših metod laboratorijske diagnostike. Njegova zanesljivost pri CVHS presega 97%, kar velja za zelo dober kazalnik za raziskave.

Za CVHS so tri PCR krvne preiskave: kvalitativna, kvantitativna in genotipizacija virusa. Prva študija (kvalitativna analiza) virusa jo zazna v krvi in ​​se zato uporablja samo za diagnozo.

Druga (kvantitativna) študija določa stopnjo virusne obremenitve telesa, zato se uporablja za spremljanje učinkovitosti zdravljenja.

Tretja PCR (genotipizacija) pojasnjuje diagnozo, ugotavlja genotip virusa, kar je zelo pomembno za imenovanje pravilnega protivirusnega zdravljenja.

Bistvo tehnike verižne reakcije s polimerazo je uporaba encimov, ki množijo genski material patogena v biomaterialu. V postopku takega razmnoževanja se epruveta s krvjo večkrat segreje in ohladi na temperaturo, potrebno za pospešitev encimske reakcije. Zaradi teh manipulacij se količina virusnega genoma večkrat poveča, kar omogoča, da se odkrije tudi z minimalno količino.

PCR diagnostika ima veliko prednosti pred drugimi laboratorijskimi testi:

• visoka občutljivost - 97-98%;
• zajamčena analitična specifičnost (razkriva točno patogen, ki ga želite najti, in ne s tem povezanega seva);
• hitrost izvajanja (traja največ 2 dni, da se doseže sklep).

Tri vrste testov PCR

Visokokakovostna PCR analiza je dodeljena vsem bolnikom, pri katerih je ELISA analiza odkrila protitelesa proti virusu HVGS. Po izvedbi visokokakovostne PCR lahko dobimo dve odzivni možnosti: "zazna se RNA" ali "RNA ni zaznana." Za odkrivanje najmanjše količine virusa v krvi so potrebni testni sistemi z občutljivostjo najmanj 50 ie / ml. Če je koncentracija virusa v krvi bolnika manjša, kot jo lahko določi diagnosticum, je lahko rezultat študije lažno negativen. Da bi se izognili takšni diagnostični napaki, bi morali laboratoriji, ki izvajajo diagnostiko PCR, imeti visoko občutljive testne sisteme. V laboratoriju "Invitro" se na primer uporabljajo testi z občutljivostjo 15 IU / ml. Laboratorijski delavci so dolžni zagotoviti informacije o občutljivosti testov bolnikom in zdravnikom na njihovo prvo zahtevo.

Kvantitativna analiza PCR določa stopnjo viremije, to je koncentracijo patogena v krvi, virusno obremenitev. Rezultat te študije, v nasprotju z visokokakovostno PCR, je izražen v številkah, na primer 2 × 10 * 6 ie / ml, kar pomeni 2 milijona mednarodnih enot v 1 ml krvi. Nekateri laboratoriji uporabljajo drug kazalnik - število kopij / ml. Ta dva kazalca sta preprosta za pretvorbo: 1 mednarodna enota je enaka 4 izvodom RNA. Tako bo 2 x 10 x 6 ie / ml pomenilo, da je 8 x 10 x 6 kopij virusne RNA v 1 ml, t.j. 8 milijonov kopij v 1 ml krvi.

Genotipizacija je definicija enega od šestih genotipov virusa. Klinična slika, hitrost razvoja zapletov jeter in prognoza za prihodnje življenje bolnika sta odvisni od genotipa povzročitelja. Genotip virusa je zelo pomemben že v fazi diagnoze, saj je kombinacija zdravil in trajanje terapevtskega poteka, ki se dodeli bolniku, odvisna od njegove pravilne določitve.

Toda tudi ta navidezno »popolna« laboratorijska raziskava ima svoje pomanjkljivosti:

• študija ponavlja genetski material vseh patogenov, tudi neživih, ki lahko izkrivijo rezultat. Zato, da bi spremljali učinkovitost s pomočjo PCR, se ponovna analiza izvede ne prej kot 2 meseca po prejšnjem, tako da lahko mrtvi virusi »zapustijo« bolnika;
• del virusnega genoma, ki je določen z uporabo testnih sistemov, je lahko teoretično prisoten pri drugih virusih ali mikroorganizmih, zato obstaja možnost lažno pozitivnega odziva;
• virusi hitro mutirajo. Včasih je hitrost in obseg mutacije virusa tako visoka, da preskusni sistem preneha ujeti njihov genom. Posledično je možen lažno negativen rezultat.

Proizvajalci laboratorijskih testnih sistemov za diagnostiko PCR stalno izvajajo teste, vključno z navzkrižnimi reakcijami in občutljivostjo za določen genotip virusa.

Kako opraviti PCR test za hepatitis C?

Da bi bil zaključek preiskave PCR zanesljiv, je treba strogo upoštevati pravila priprave za njegovo izvajanje:

• študija poteka na prazen želodec (glukoza, maščobe, minerali, ki pridejo v kri iz hrane, lahko vplivajo na hitrost in kakovost encimske reakcije);
• vrzel med zadnjim obrokom in vzorčenjem krvi za analizo mora biti vsaj 8 ur;
• na predvečer študije je prepovedano jemanje alkohola in uživanje maščobnih živil, katerih obdobje izločanja je podaljšano;
• dan pred odhodom v laboratorij se mora izogibati močnemu fizičnemu in čustvenemu stresu;
• do odvzema vzorcev krvi ni priporočljivo kaditi.

Da bi se izognili pojavu napačnih zaključkov, mora domnevni bolnik priti v laboratorij malo prej kot vzeti krv. To traja 15-20 minut, da oseba ujame svoj dih, pomiri se. Adrenalin, ki je prisoten v krvi po hitrem sprehodu, lahko vpliva na rezultat pregleda.

Če pacient na analizo vzame kakšno zdravilo, mora o tem obvestiti zdravnika. Možno je, da bo treba nekatere od njih zavrniti že nekaj časa (če je mogoče).

Rezultat analize PCR za hepatitis C

Dekodiranje rezultatov je opravil laboratorijski zdravnik laboratorija, ki je opravil analizo. Dekodiranje je določanje odstopanja rezultata, dobljenega iz norme. Stopnjo kazalnikov določi neposredno proizvajalec testnega sistema, ki ga uporablja laboratorij za diagnostiko. Zato ni presenetljivo, da je v nekaterih laboratorijih virusna obremenitev določena v ie / ml, v drugih pa v kopijah / ml.

Po prejetju sklepa je treba biti sposoben pravilno razlagati. Zdravljenje rezultatov študije mora opraviti lečeči zdravnik bolnika s hepatitisom C. Zdravnik lahko le po objektivnem, instrumentalnem in laboratorijskem pregledu bolnika pridobi zadostno količino podatkov za pravilno interpretacijo dobljenih rezultatov PCR.

Ocenjevanje kvalitativne analize praviloma ne povzroča težav niti pri bolnikih. Rezultat je lahko samo eden: "odkrit" ali "ni zaznan". V tem primeru je drugi od njih norma.

Kazalnike kvantitativne analize je težje razlagati. Prikazuje stopnjo virusne obremenitve bolnika. Tudi med hepatologi ni soglasja o tem, kako zdraviti odkrito viremijo. Večina zdravnikov verjame, da je treba upoštevati veliko obremenitev več kot 8 × 10 x 5 ie / ml. Šteje se, da je obremenitev več kot 1 × 10 * 7 ie / ml zelo visoka, nizka obremenitev pa je manjša od 4 × 10 x 5 ie / ml.

Stopnja virusne obremenitve kaže na virulenco (agresivnost) virusa: večja je njegova količina v krvi, hitreje se lahko pojavijo zapleti jeter. Visoka koncentracija virusa v krvi nosečnice povečuje verjetnost njegovega prodiranja skozi hematoplacentno pregrado za plod. Viremija vpliva tudi na učinkovitost zdravljenja: pri nizkem številu je učinkovitost terapije višja kot pri visokih.

Da bi bili prepričani v natančnost analize PCR za hepatitis C, je treba dati prednost samo tistim laboratorijem, ki so dobro dokazani. Politika oblikovanja cen v tem primeru ne bi smela imeti glavne vloge.

Uporaba diagnostike PCR

Polimerna verižna reakcija (PCR) v molekularni biologiji je eksperimentalna metoda za odkrivanje virusov. Omogoča bistveno povečanje koncentracije določenih fragmentov nukleinskih kislin (DNA) v vzorcih biološkega materiala, kar omogoča, da jih določimo (prepoznamo) in preštejemo.

Analiza se izvede na naslednji način. V cevko se vnese genski material (krvni vzorec), ki lahko potencialno vključuje želeni gen. Prav tako so postavljeni primerji - kemično sintetizirani segmenti majhne dolžine želenega gena.

V posodo se doda tudi DNA ali RNA polimeraza, ki je sposobna poravnati verigo nukleinske kisline, ki je popolnoma identična originalu. V nastali sestavi se vbrizga in niz štirih prostih nukleotidov - poseben gradbeni material za RNA ali DNK, od katerih eden vsebuje radioaktivne fosforne delce.

Nastala zmes se segreje na 95–96 ° C, zato so tkani dve DNK, ki se navadno prepletata. Nato zdravilo ohladimo, pri čemer se primeri sami pripnejo na želeno regijo virusnega genoma in preprečijo, da RNA (ali DNA) ponovno oblikuje dvojno vijačnico.

V procesu hlajenja polimeraza išče prosto verigo nukleotidov. Za delovanje tega encima je potrebna enojna veriga nukleotidov. Ker polimeraza zdrsne vzdolž verige DNA (kot obroč na vrvi), ne more delati na dvojni vijačnici.

Po tem se izvede ponavljajoči se cikel segrevanja, zaradi katerega so ločene verige nukleotidov. Pri vsakem od teh ciklov PCR se količina v vzorcu želenega gena hepatitisa poveča eksponentno, preostali genski material pa se proizvaja (raste) linearno.

Po čiščenju raztopine iz nukleotidnih ostankov in ločevanju z elektroforezo DNA verig z parametrom molekulske mase, lahko zlahka ugotovimo, ali obstaja želeni gen v vzorcu, ki ga proučujemo ali ne.

Koristi PCR

Laboratorijsko testiranje z uporabo PCR omogoča pridobitev še več informacij kot prisotnost virusne RNA. Z določitvijo parametra ravni radioaktivnega sevanja je mogoče ugotoviti, koliko genetskega materiala je bilo prvotno vsebovano v vzorcu, ki je bil raziskan. V primeru hepatitisa določite indikator ravni virusne obremenitve.

Druga prednost te metode je zelo visoka stopnja občutljivosti reakcije CR. To je veliko višje od klasičnih metod odkrivanja virusov. V idealnem primeru je za identifikacijo želenega gena za PCR dovolj le en virus v vzorcu.

Poleg tega je PCR popolnoma specifičen. Njegovi primerji so zasnovani tako, da popolnoma ustrezajo edinstvenim regijam želenih genov, ki jih nobeno drugo zaporedje nima. Tako kot so prstni odtisi edinstveni, ima vsak gen edinstvene sekvence nukleotidov.

Kvalitativna analiza PCR

Kvalitativna analiza razkriva le prisotnost virusa v krvi. Ta preskus je treba opraviti za vse bolnike, pri katerih so v krvi našli protitelesa proti hepatitisu C. To lahko povzroči samo eno od dveh vrednosti: »odkrito« ali »ni zaznano«. Pri zdravi osebi je treba normo (referenčno vrednost) „ne odkriti“.

Takšni rezultati kvalitativnega raziskovanja so posebej interpretirani:

• Rezultat je "zaznan". To pomeni, da je bil v analiziranem vzorcu odvzetega fragmenta RNA, ki je specifičen za virus hepatitisa C, ugotovljeno, da je bolnik okužen z virusom hepatitisa C. Če je rezultat visoke kakovosti PCR "zaznan", to kaže, da se virus množi. in v tem času okuži nove jetrne celice v telesu.
• Rezultat »ni zaznan«. Takšna razsodba kaže, da v analiziranem vzorcu pridobljenega biološkega materiala v tem laboratoriju ni bilo najdenega fragmenta RNA, ki je specifičen za virus hepatitisa C. Alternativno je bila koncentracija RNA v okužbi patogena v tem vzorcu pod mejo občutljivosti testa.

V akutni fazi RNA virusa hepatitisa C se takšne kvalitativne študije z metodo PCR lahko odkrijejo že po 1-2 tednih takoj po okužbi telesa, to je dolgo pred pojavom protiteles proti samemu hepatitisu.

Nezanesljive rezultate preskusa te študije lahko dobimo z:

• kontaminirani biomaterial;
• prisotnost heparina v krvi pacienta;
• prisotnost kemičnih ali beljakovinskih snovi (inhibitorjev) v vzorcu, ki vplivajo na različne komponente PCR.

Za izvedbo kvalitativne analize PCR ni potrebna posebna priprava pacienta za študijo. Uporabljen material je venska kri.

Vrednotenje rezultatov

Visokokakovostni PCR testi imajo določeno stopnjo občutljivosti, odvisno od natančnosti raziskave in ravni opreme v laboratoriju pa lahko variirajo od 10 do 500 ie / ml.

To pomeni, da če je virus v vzorcu krvi prisoten pri zelo nizki koncentraciji (manjši od vrednosti praga občutljivosti tega laboratorija), se lahko rezultat za bolnega bolnika »ne zazna«. Zaradi tega je pri izvajanju kvalitativne analize PCR z nizko stopnjo viremije (nizka koncentracija virusa), na primer pri bolnikih, ki se zdravijo z protivirusno terapijo, zelo pomembno poznati prag občutljivosti tega diagnostičnega sistema.

Variante diagnostičnih sistemov

Za nadzor virološkega odziva je priporočljivo uporabiti diagnostične sisteme s pragom občutljivosti najmanj 50 ie / ml za protivirusno zdravljenje. Ta merila so izpolnjena, na primer, z analizatorji Cobas Ampicolor HCV-Test (natančnostjo do 50 IU / ml) in RealBest HCV RNA (z občutljivostjo 15 IU / ml).

V skladu s priporočili Svetovne zdravstvene organizacije je za dokončno diagnozo hepatitisa C treba določiti le na podlagi trikratnega odkrivanja RNA virusa C v vzorcih seruma bolnika, če ni drugih sort hepatitisa.

Poleg metod PCR se uporablja tudi TMA test (metoda transkripcijske ojačitve) za odkrivanje HCV RNA pri bolnikih. Ima najboljši prag občutljivosti (5–10 ie / ml), vendar v naši državi takšna metoda testiranja še ni zelo pogosta.

Razpon zaznanih sprememb virusov

Takšna kvalitativna določitev v serumu RNA virusa hepatitisa C omogoča določitev več genotipov tega virusa. Trenutno znanost pozna več kot šest genotipov tega virusa, kot tudi približno 10 podtipov te bolezni.

V naši državi navadni virusi 1, 2, 3 genotipi. Laboratoriji lahko zaznajo naslednje genotipe: 1a in 1b, 2a, 2b in 2c, kot tudi 3, 4, 5a in 6, ne glede na podtip. Za vse modifikacije virusa je specifičnost detekcije 100%.

Kvantitativna analiza PCR

Z uporabo kvantitativnega testa PCR se določi koncentracija virusa hepatitisa v krvnih vzorcih (virusna obremenitev). Ta test za viremijo (koncentracija virusa) vam omogoča, da določite število enot določenega genskega materiala (same virusne RNA), ki se odkrije v določeni količini. V tem primeru določite njegovo koncentracijo v 1 ml, kar ustreza 1 cu. glej

Parametri kvantitativne analize so izraženi v številkah, zato se kot merilne enote uporabljajo mednarodne enote (ie) na mililiter (ml), imenovane IU / ml. Zdaj je v nekaterih laboratorijih mogoče določiti količino virusa v drugih enotah: število kopij na ml je navedeno kot kopije / ml.

• Datumi Za hepatitis C je tako kvantitativno analizo PCR izvedeno tik pred začetkom zdravljenja. Potem na 1., 4., 12. in 24. teden. Vrednotenje 12. tedna je indikativno, kar omogoča določitev učinkovitosti terapije.
• Priprava na analizo. Za izvedbo kvantitativne analize PCR ni potrebna posebna priprava pacienta za študijo. Pol ure pred vzorčenjem ne smete kaditi. Kot laboratorijski material se uporablja venska kri.

Vrednotenje rezultatov

Za različne laboratorijske testne sisteme obstajajo različni pretvorbeni faktorji za ta kazalnik v IU / ml. V povprečju vzamejo parameter pretvorbe, v katerem 4 kopije / ml = 1 ie / ml. To je, na primer, če laboratorij poda rezultat analize PCR 2,4 * 10 6 kopij / ml, potem je treba ta parameter razdeliti na 4 in dobili bomo 6 * 10 5 ie / ml.

Obremenitev 800.000 ie / ml velja za visoko, kar ustreza približno 3.000.000 kopij / ml. Nizka viremija, po mnenju nekaterih avtorjev, ustreza parametrom kvantitativne PCR pod 400.000 IU / ml.

Kot rezultat kvantitativnega preskusa se končni rezultati lahko dobijo ne v obliki digitalne vrednosti, ampak: „pod merilnim območjem“ ali „ni zaznano“.

• Ocena: "pod merilnim območjem." To kaže, da kvantitativni test ni uspel odkriti virusne RNA virusa hepatitisa C, vendar je virus sam v telesu prisoten v zelo nizkih koncentracijah. To dokazuje dodatni preskus kakovosti, ki potrjuje prisotnost virusa.
• Ocena: ni zaznana. Ta rezultat kaže, da kvantitativni test ni na voljo v vzorčnem RNA virusu.

Parameter virusne obremenitve najprej določa stopnjo nalezljivosti bolezni, stopnjo "nalezljivosti" bolnika. Višja kot je koncentracija pacientovega virusa, večja je verjetnost prenosa na druge ljudi. Na primer med spolnim odnosom z bolnikom ali navpično. Ta kvantitativni kazalnik prav tako pomaga določiti učinkovitost zdravljenja bolnika.

Izvajanje kvantitativne analize CCP je pomembno za antivirusno zdravljenje, ocenjevanje njegove uspešnosti in načrtovanje trajanja tečaja. Tako se lahko s hitrim odzivom telesa na zdravljenje in nizko stopnjo viremije trajanje zdravljenja zmanjša.

Če se kvantitativni parameter PCR počasi zmanjšuje, je treba protivirusno zdravljenje podaljšati ali spremeniti. Če je raven virusne obremenitve nizka, je to ugoden dejavnik pri zdravljenju, če je zvišana, potem je uporabljena metoda neučinkovita, zdravila ali metode za njihovo uporabo pa je treba spremeniti.

Kvalitativna in kvantitativna analiza PCR za hepatitis C: negativna, pozitivna, transkript

Hepatitis C je virusna bolezen jeter, ki jo povzroča flavivirus HCV (iz angleškega virusa hepatitisa C), katerega struktura vsebuje molekulo ribonukleinske kisline (RNA). RNA nosi genetsko kodo virusa. Njegova prisotnost omogoča analizo PCR za hepatitis C. t

Nevarnost HCV za osebo je v tem, da lahko tako imenovano serološko okno (čas med okužbo in pojavom reakcije imunskega sistema) traja precej dolgo - od nekaj tednov do šest mesecev.

Ne zazna okužbe in pravočasno začne z zdravljenjem.

Odvisno od posameznih značilnosti organizma se lahko nosilec HCV manifestira v akutni obliki, kot tudi kot kronična bolezen, ki bo zahtevala dolgo in drago zdravljenje. Pri odkrivanju protiteles proti HCV se izvaja serija laboratorijskih testov, vključno s PCR za hepatitis C. Ta test se opravi za vse ljudi, pri katerih so našli krvna protitelesa proti HCV.

Kaj je PCR analiza?

Laboratorijska analiza PCR za hepatitis C - študija biološkega materiala za ugotavljanje prisotnosti flavavirusa.

Polimerazna verižna reakcija (kot je kratica) kaže kvantitativno vrednost virusne poškodbe telesa, njegove kvalitativne značilnosti in genotip virusa, ki vsebuje RNA.

Na njihovi podlagi in na podlagi dodatnih analiz so določeni način in trajanje zdravljenja ter epidemiološki dejavnik (stopnja tveganja prenosa na drugega nosilca).

Kaj je analiza RNA hepatitisa C?

PCR s hepatitisom C se imenuje tudi analiza RNA (HCV RNA), ker Flavavirus vsebuje delce RNA z velikostjo viriona 30-60 nm. Ena od značilnosti tega mikroorganizma je visoka nagnjenost k mutacijam.

Vsaka od podvrst (genotipov) virusa ima drugačno odpornost, kar povzroča različne metode zdravljenja in naravo nadaljnje napovedi za bolnika.

Biološki material (venska kri) se daje na prazen želodec in se praviloma testira z metodo PCR v realnem času (zelo občutljiva diagnostika v realnem času z nižjo mejo zaznavnosti 15 IU / ml z zaprtimi avtomatskimi sistemi).

Obstajajo še drugi testi, na primer COBAS AMPLICOR z občutljivostjo 50-100 IU / ml. Za vsak laboratorijski test je pomemben prag občutljivosti, tj. sposobnost reagenta, da zazna minimalno koncentracijo virusa v biološkem materialu.

Vrste analiz za hepatitis C s PCR

PCR hepatitisa C vključuje tri pomembne sestavine:

• kvalitativna analiza;
• kvantitativna analiza;
• genotipizacija.

Ti testi lahko določijo naravo viremije kot tudi genetske značilnosti patogena. Glede na občutljivost diagnostičnega sistema se študija izvede enkrat, včasih pa se opravi še en preskus z bolj občutljivim reagentom, ki potrdi ali izboljša rezultate.

Visokokakovostni PCR hepatitis C

Analiza PCR s hepatitisom C, kvalitativna, je drugo skupno ime za analizo verižne reakcije s polimerazo. Standardna občutljivost testa, ki omogoča zaznavanje prisotnosti virusnih lezij, je v razponu od 10-500 ie / ml.

Negativna analiza PCR za hepatitis C kaže, da je koncentracija virusa v krvi bolnika pod pragom občutljivosti diagnostičnega sistema.

Če je visokokakovostni PCR dal odgovor "ni zaznan", potem je za nadaljnjo obdelavo pomembno ugotoviti prag občutljivosti reagenta.

Beljakovinske frakcije flavavirusa se pojavijo veliko kasneje.

Kvantitativni PCR hepatitisa C

Kvantitativna PCR virusa hepatitisa C je indikator virusne obremenitve, ki odraža raven koncentracije RNA v telesu. To je kazalnik, ki kaže, koliko fragmentov virusne RNA vsebuje kubični centimeter krvi. Rezultati PCR hepatitisa C RNA v kvantitativnem preskusu v običajnem sistemu so prikazani v mednarodnih enotah na mililiter (ie / ml) in se lahko zabeležijo na različne načine, na primer 1,7 milijona ali 1,700.000 IU / ml.

Kvantitativna PCR diagnostika hepatitisa C je predpisana bolnikom pred začetkom protivirusnega zdravljenja in 12. tedna zdravljenja, da bi ocenili rezultate izbrane metode zdravljenja HCV. Virusna obremenitev omogoča določitev treh pomembnih kazalcev bolezni:

• infektivnosti, tj. stopnjo tveganja prenosa virusa z enega nosilca na drugega (večja je koncentracija RNA, ki je vir flavavirusa, večja je verjetnost okužbe druge osebe, na primer prek spolnega stika);
• metoda in učinkovitost zdravljenja;
• trajanje in prognoza protivirusne terapije (višja je virusna obremenitev, daljša je trajanje zdravljenja).

Kvantitativna PCR diagnostika hepatitisa C je odvisna od vrste laboratorijskega testa in praga njegove občutljivosti. Spodnja meja norme velja za indikator do 600.000 IU / ml, povprečna vrednost pa je med 600.000-700.000 IU / ml. Rezultati 800.000 ie / ml in več veljajo za visoke ravni virusa, ki vsebuje RNA.

Genotipizacija

Zaradi visoke mutacijske aktivnosti HCV v naravi je pri testiranju pomembno ugotoviti, kateri genotip virusa je v krvi pacienta. Na planetu je bilo zabeleženih 11 genotipov virusa hepatitisa C, ki vključujejo veliko podvrst (podtipov). Na ozemlju Ruske federacije se razdelijo 1,2 in 3.

PCR RNA hepatitisa C skupaj z genotipizacijo je zelo pomembna komponenta analize omogoča zdravniku, da določi odpornost (odpornost) virusa, izbere ustrezna zdravila in predpiše potek zdravljenja.

Genotipizacija omogoča tudi posredno določanje stanja jeter. Na primer, genotip 3 HCV pogosto spremlja steatoza, v kateri se maščoba kopiči v celicah organa.

Krvna preiskava za PCR za hepatitis C mora ustvariti številko, ki določa genotip. Laboratorijski odzivi lahko rečejo „ni tipizirano“ - in to pomeni, da je virus v človeški krvi, ki ga testni sistem ne zazna. To lahko pomeni, da genotip ni značilen za določeno geografsko območje. V tem primeru morate analizo ponoviti z večjo občutljivostjo diagnostičnega sistema.

Dekodiranje PCR analize za hepatitis C

Test za PCR kvantitativno dešifriranje hepatitisa C lahko temelji na zgornjih podatkih. Pri pridobivanju rezultatov laboratorijskih testov se običajno zapišejo naslednji podatki:

• »Najdeno« / »ni bilo mogoče najti« (PCR visoke kakovosti za hepatitis C);
• število frakcij, ki vsebujejo RNA, na primer 831,680 ME / ml (kvantitativna PCR analiza);
• številka, ki določa genotip HCV, na primer - 1, 2, 3, 4;
• Ime testa je najpogosteje v realnem času.

Najpomembnejša stvar pri dešifriranju PCR analize za hepatitis C je druga točka, ki prikazuje virusno obremenitev, ki določa prognozo, metodo in trajanje zdravljenja.

Če je test PCR za hepatitis C negativen in je test ELISA pozitiven - kaj to pomeni?

Za dešifriranje laboratorijskih testov je pomembno, da stopite v stik s hepatologom ali specialistom za nalezljive bolezni, ki bo pojasnil informacije, pridobljene v skladu z vrsto diagnostičnega sistema in pragom občutljivosti. V medicinski praksi je veliko podatkov o krvnih preiskavah, ki lahko zavarujejo osebo brez medicinske izobrazbe.

Na primer, če je test za PCR s hepatitisom C negativen in je test ELISA pozitiven, to lahko pomeni, da v krvi bolnika trenutno ni HCV, vendar je že imel akutno obliko hepatitisa C. t v krvi so protitelesa, ki so bila proizvedena po invaziji virusa v preteklosti. V sodobni medicinski praksi pa ELISA analiza ni dovolj zanesljiva in pogosto daje netipične rezultate, zato jo zdravniki uporabljajo kot primarni presejalni test. Pri diagnosticiranju bolezni strokovnjaki natančno vodijo teste PCR.

Uporaben video

Naslednji videoposnetek na zelo podroben in zanimiv način pojasnjuje bistvo metode PCR, kako poteka analiza:

Zaključek

Za analizo PCR hepatitisa C se običajno uporablja venska kri. Najpogosteje pride do dvojnega vnosa biološkega materiala - za ELISA in neposredno za test PCR. Za pravilne rezultate preskusov je potrebno izpolnjevanje osnovnih pravil za laboratorijsko zbiranje biološkega materiala:

• kri za analizo dajemo v prvi polovici dneva na prazen želodec;
• med obrokom in zbiranjem krvi mora trajati vsaj 8 ur;
• Alkohol in ocvrta živila je treba pred testom izključiti.
• dan pred darovanjem krvi se je treba izogibati visokim fizičnim naporom.

Rezultati testov krvi so običajno pripravljeni naslednji dan.