Razpoložljivost sodobnih zdravil proti hepatitisu B (HBV) z jasnimi indikacijami za njihovo dajanje zahteva natančno in hitro preverjanje diagnoze. Vendar pa se zaradi pomanjkljivih kliničnih podatkov v prvih tednih bolezni in metod analize z omejenim imunskim preskusom stopnja diagnoze zmanjša.
Prisotnost markerjev anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe vam omogoča potrditev HBV ali ugotovitev dejstva prejšnje bolezni. Vendar pa je možno ugotoviti prisotnost aktivnih virusnih delcev v krvi in prešteti njihovo število v času študije s PCR - kvantitativni test v realnem času za odkrivanje hepatitisa B. Metoda v primerjavi z diagnostičnimi metodami ELISA rešuje diagnostične težave in omogoča napovedovanje poteka bolezni med prejemanjem protivirusna zdravila.
Osnove diagnostike bolezni
Diagnoza hepatitisa B temelji na oceni kliničnih manifestacij, encimske imunske preiskave in instrumentalnih metod raziskovanja. Bolezen poteka v akutni fazi po inkubacijski dobi in, odvisno od odmerka okužbe in učinkovitosti zdravljenja, vstopi v kronično fazo. Glavni cilj zdravljenja je preprečiti kroničenje, to je izločanje vseh virusnih delcev iz krvi. Klinični potek bolezni je zdravilo brez naknadne viremije.
Dejstvo, da je okužba odpravljena, je treba dokazati s kvantitativno metodo raziskovanja.
Ker katerakoli kvalitativna encimska imunska preiskava omogoča diagnozo HBV posredno, torej ne kaže prisotnosti patogena v notranjem okolju telesa, ampak označuje imunski odziv na okužbo, spremljanje učinkovitosti terapije in dejstvo, da je zdravljenje težko dokazati. Zato je treba bolnika s hepatitisom B ali ob prisotnosti diagnostičnih meril v svojo korist opraviti verižna reakcija s polimerazo, da bi količinsko opredelili število virusnih delcev v krvi. Diagnostična stopnja je pomanjkanje kopij DNK okužbe.
Opis diagnostične metode
Zelo občutljiva metoda PCR diagnoze hepatitisa B spada v kategorijo gensko spremenjenih molekularno-bioloških študij. Skozi to določimo količino virusne DNA v biološkem materialu pacienta in dopustno hitrost. Glede na dobljene rezultate se ugotovi število virusnih delcev na enoto prostornine. Material za diagnostični test je venska kri bolnika. Vnos je zaželen na prazen želodec zaradi možnega učinka chyle seruma na rezultat študije.
Dobljeni rezultati morajo biti posredovani zdravniku za interpretacijo in določitev nadaljnje taktike. Neodvisno dekodiranje ne predstavlja diagnostične vrednosti.
Pomen števila virusnih delcev, dobljenih z metodo PCR, presega vrednost encimskih imunotestov. Ker analiza v realnem času prikazuje prisotnost povzročitelja bolezni v krvi, je njena vsebnost informacij višja od drugih. Če test ELISA pokaže le prisotnost protiteles, ki se opazijo od 4 tednov inkubacijskega obdobja in traja več kot 8 tednov po odstranitvi virusa iz krvi, potem verižna reakcija s polimerazo jasno potrjuje aktivni potek bolezni ali njeno zdravljenje, označuje dinamiko predpisanega zdravljenja.
Polimerizna verižna reakcija s kvantitativno določitvijo delcev patogenov rešuje diagnostična vprašanja v prid ustavitvi zdravljenja zaradi okrevanja ali nadaljevanja zdravljenja zaradi pomanjkanja učinkovitosti. Metoda je čim bolj specifična za virus HBV in se odlikuje po sprejemljivi napaki.
Indikacije in cilji uspešnosti
Kvantitativna analiza hepatitisa B je najbolj zanesljiva in omogoča potrditev podatkov, pridobljenih z metodami ELISA. Imenovan je, ko:
- pridobitev pozitivnega diagnostičnega rezultata ELISA;
- zdravljenje bolnika z ugotovljeno diagnozo virusne poškodbe jeter;
- pri diagnozi mešane etiologije hepatitisa;
- po potrebi določite virusno obremenitev pri bolniku.
Ker se metoda encimske imunske metode bolj uporablja v praksi specialista za nalezljive bolezni, je mogoče nekatere bolnike z blago boleznijo zdraviti, ne da bi morali prešteti virusno obremenitev. Toda PCR na splošno velja za „zlati standard“ diagnostike v hepatologiji, saj zaradi edinstvenosti njegovega rezultata odpravlja številna organizacijska vprašanja. Zato ima usmeritev bolnika za kvantitativno analizo naslednje cilje:
- pridobivanje podatkov o številu virusnih delcev v krvi pacienta;
- potrditev akutnega poteka hepatitisa in pravočasno preverjanje kronične bolezni;
- stalno odkrivanje latentnih nosilcev virusa s pozitivnimi testi ELISA, spremljanje njihove viremije;
- odločanje o imenovanju protivirusnega zdravljenja, njegovi kombinaciji in prenehanju.
Najpomembnejši cilj uporabe kvantitativnega testa PCR za odkrivanje HBV je določitev možnih kombinacij zdravljenja. V primeru visokega virusnega bremena rezultat analize daje specialistu možnost, da nadaljuje s kombinacijo zdravil. Med zdravljenjem je enostavno določiti učinkovitost predpisanega farmakološkega zdravljenja, ki temelji na rezultatu PCR. Vodeno le s podatki o imunoloških metodah, je nemogoče pravočasno določiti dejstvo zdravljenja in njegovo trenutno učinkovitost. Zato je kvantitativni test v realnem času potrebna analiza pred začetkom zdravljenja akutnega hepatitisa, latentne virusne okužbe z visoko viremijo in kroničnega HBV.
Interpretacija rezultatov kvantitativnih testov PCR
Razlago rezultatov kvantitativnega testa PCR mora opraviti lečeči zdravnik bolnika. Potrebno je ovrednotiti diagnostični indikator in določiti terapevtske taktike.
Standardni analizator je sposoben proizvesti kvantitativni kazalnik, ki odraža število kopij virusne DNA, ki so prisotne v preučevani venski krvi. Merske enote - kopije / ml, ie / ml (kopije na mililiter, mednarodne enote na mililiter). Razlaga rezultatov je podana v tabeli z navedbo različnih merskih enot.
Dešifriranje krvnega testa za hepatitis B
Hepatitis B je ena najbolj nevarnih bolezni našega časa.
Povzroča ga virus, ki vstopi v telo, ko pride kri v stik z okuženim biološkim materialom, vključno s tistimi, ki ostanejo na pripomočkih za manikuro, medicinskih pripomočkih, napravah za tetoviranje, ki niso bile ustrezno dezinficirane. Virus se lahko prenese tudi prek spolnega stika.
Hepatitis B analiziramo tako, da diagnosticiramo bolezen z jemanjem krvi bolnika.
Okužba poteka prek spolnih in domačih poti, vrsta širjenja je hematogena (prek krvi). Ko je virus okužen, vstopi v hepatocite (jetrne celice), ki se proizvajajo v prihodnosti. Skozi krvni obtok se bolezen hitro širi po vsem telesu. Za virus B (HBV) je značilna visoka odpornost na učinke temperature in kisline ter je sposobna ohraniti svoje škodljive lastnosti šest mesecev.
Katere krvne preiskave imate za hepatitis B?
Če so pokazali prve simptome hepatitisa B, je treba pred začetkom zdravljenja in zdravljenja opraviti teste. Test krvi je zanesljiva metoda za namestitev okužbe s hepatitisom. Izvedeni v laboratoriju. Testni material za hepatitis B se daje na prazen želodec: od zadnjega obroka mora miniti najmanj 8 ur.
Za odkrivanje virusa hepatitisa B v krvi se uporabljajo tri vrste testov, ki označujejo prisotnost virusa v krvi:
- analizo prisotnosti HBV DNA v materialu s preučevanjem verižne reakcije s polimerazo;
- kvalitativna študija o prisotnosti proteina Anti-HBc IgG in antigena HBsAg (najdemo ga pri zdravih, okuženih in bolnih);
- analizo za detekcijo proteinov HBeAg in Anti-HBc IgM (označujeta poslabšanje bolezni).
Za popolnost je priporočljivo istočasno izvajati raziskave na več markerjih.
Imunološki testi za hepatitis B
Najpogostejši testi za hepatitis B so imunološki. Njihovo bistvo je odkriti protitelesa v krvi, ki jih proizvaja telo ali jetra. Vzorci so kvalitativni in kvantitativni. Testi in prepisi hepatitisa B običajno vsebujejo informacije o več značilnih beljakovinah. Med preskusom se testirajo naslednja protitelesa: t
Pojavi se v zgodnjih fazah okužbe pred nastopom kliničnih znakov.
Pozitivni marker kaže na prisotnost virusa, vendar ga najdemo tudi pri popolnoma zdravih ljudeh. Če je v krvi prisotno manj kot 0,05 ie / ml, je rezultat negativen. Če je koncentracija protiteles višja, se analiza šteje za pozitivno.
Najdemo ga v skoraj vseh okuženih bolnikih. Vodenje kazalcev na visoki ravni lahko kaže na prehod bolezni v kronično obliko tečaja. Pozitivni marker kaže na prisotnost bolezni v obdobju poslabšanja, podaljšanega okrevanja. HBeAg je zelo slab znak. Bolnik je zelo nalezljiv. Običajno se v krvi ne odkrijejo beljakovine.
Obstajata dve vrsti anti-HBc protiteles: IgG in IgM. Prisotnost IgM v krvi je znak poteka akutne oblike, visoka infektivnost bolnika in možnost pererohoda bolezni v kronični obliki. Navadno prisotnost IgM ni dovoljena. IgG je ugoden indikator. Oznaka označuje, da telo oblikuje imuniteto proti hepatitisu B.
Če je v krvi odkrit marker, lahko sklepamo o ugodnem poteku bolezni in nastanku zaščitne imunosti pri bolniku.
- Anti-HBs.
Oznaka signalizira okrevanje in nastanek imunosti.
Odkrivanje HBV DNA s PCR
Za laboratorijsko preiskavo in odkrivanje prisotnosti diagnoze hepatitisa B v krvi se uporablja metoda PCR. Način polimerazne verižne reakcije je najbolj aktualen na področju odkrivanja bolezni.
Končno dekodiranje kaže, ali obstajajo sledi genske prisotnosti patogena v jetrnih celicah.
Če se pri raziskavah upoštevajo vsa načela, je rezultat popolnoma natančen. Metoda se uporablja za diagnozo, uporabo v procesu zdravljenja in v protivirusni terapiji.
- Visokokakovostni PCR v skupnem seštevku ima samo dva pomena: »odkriti« in »ni zaznan«. Postopek se izvaja za vsakega bolnika s sumom na hepatitis. S povprečno občutljivostjo testa PCR v razponu od 10 do 500 ie / ml, z nizko stopnjo virusne DNA v krvi, genskega materiala ne bomo odkrili.
- Kvantitativna PCR. V nasprotju s kvalitativnim, to ne pomeni le hepatitis B. Kvantitativna analiza kaže, kako daleč od normalnih vrednosti zdravega človeka ni bolnikov kazalec v številčnem smislu. Metoda omogoča oceno stopnje bolezni in predpisovanje zdravljenja. Občutljivost testa PCR za kvantitativno sledenje je višja kot pri kvalitativni metodi. Osnova je štetje zaznane DNK, ki je izražena v kopijah na mililiter ali ie / ml.
Poleg tega kvantitativni PCR omogoča vpogled v učinke zdravljenja in pravilnost izbrane terapije. Odvisno od količine viralnega genskega materiala se lahko odloči, da se skrajša obdobje zdravljenja ali, nasprotno, da se podaljša in okrepi.
Biokemični krvni test za hepatitis B
Metoda biokemične analize je potrebna za pridobitev popolne klinične slike poteka bolezni. Ta diagnostična metoda omogoča razumevanje dela notranjih organov (jeter, ledvic, žolčnika, ščitnice in drugih). Dekodiranje omogoča razumevanje metabolizma v telesu, možne patologije presnove. Podrobni kazalniki kažejo na pomanjkanje vitaminov, makrohranil in mineralov, ki so potrebni za zdravje in življenje ljudi.
Test za hepatitis lahko opravite v katerem koli drugem diagnostičnem centru (Invitro, Gemotest, itd.). Biokemični krvni test za odkrivanje hepatitisa B vključuje naslednje sestavine.
Kvantitativna analiza encima ALT (AlAt) t
Ta encim se najpogosteje pojavi v povišanih koncentracijah pri akutnem in kroničnem hepatitisu. Snov se nahaja v jetrnih celicah in z lezijami organov skozi krvni obtok vstopa v krvne žile.
Količina in koncentracija v krvi med virusno boleznijo se nenehno spreminja, zato se raziskave izvajajo vsaj enkrat na četrtletje. ALT odraža ne le aktivnost virusa hepatitisa, temveč tudi stopnjo okvare, ki jo povzroča v jetrih. Raven ALT se z naraščanjem količine strupenih snovi jetrnega izvora in prisotnosti virusa poveča.
Kvantitativna analiza AST-encima
Beljakovine so sestavni del najpomembnejših človeških organov: jetra, živčno tkivo, ledvično tkivo, okostje in mišice. Encim sodeluje pri izgradnji najpomembnejših mišic - srca. Visoka AST pri bolniku s hepatitisom B lahko signalizira fibrozo jeter. Podobna situacija se pojavi, če alkoholna, zdravila ali katera koli druga strupena poškodba jetrnih celic.
Indikatorji pregrevanja so znak poškodbe jeter na celični ravni. Pri postavitvi diagnoze je treba upoštevati razmerje med AST in ALT (de Rytisov koeficient). Sočasno povečanje koncentracije obeh encimov je znak jetrne nekroze.
Bilirubin
Snov nastane v vranici in jetrih zaradi razgradnje hemoglobina v njihovih tkivih. Ta komponenta je del žolča. Obstajata dve proteinski frakciji: direktni bilirubin (vezan) in posredni bilirubin (prosti). Z zvišanjem bilirubina v krvi je smiselno sumiti na hepatitis ali drugo poškodbo jeter. To je neposredno povezano s citolizo jetrnih celic.
Če se količina posrednega bilirubina poveča, je najverjetneje prišlo do poškodbe parenhimskega tkiva ali Gilbertovega sindroma. Visoka raven bilirubina glede na rezultate analize je lahko posledica obstrukcije žolčnih vodov. Kadar je raven bilirubina večja od 30 mikromolov na liter, ima pacient kožni utrip, urin postane temen in belje oči spremenijo barvo.
Albumin
Sinteza tega proteina se pojavi v jetrih. Če se njegova količina zmanjša, to kaže na zmanjšanje sinteze encimov v telesu zaradi pojava hudih poškodb jetrnih celic.
Skupaj beljakovin
Če količina celotnih beljakovin postane bistveno nižja od sprejete norme, to kaže na upočasnitev delovanja jeter.
GGT (GGTP)
Encim, ki se uporablja pri odkrivanju obstruktivne zlatenice in holecistitisa. Povečanje ravni GGT je znak strupene poškodbe jeter. Lahko se izzove s kroničnim alkoholizmom in nenadzorovano uporabo drog. Beljakovine so še posebej občutljive na toksine in alkohol, pod njihovim vplivom pa njegova aktivnost hitro narašča. Ohranjanje visoke koncentracije GGT v krvi že dolgo govori o hudih poškodbah jeter.
Kreatinin
Je produkt presnove beljakovin, ki se pojavlja v jetrih. Padec nivoja je znak, da se organ upočasni.
Beljakovinske frakcije
Zmanjšanje ravni beljakovinskih frakcij je znak patologije jeter.
Dekodirna analiza za hepatitis B in vrednosti so normalne
Diagnosticiranje hepatitisa B je kumulativna študija kazalnikov. Le njihova izčrpna analiza omogoča, da lahko sklepamo o okužbi bolnika. Razmislite o analizi dekodiranja za hepatitis B. Za primerjavo, hitrost snovi v krvi.
Dešifriranje krvnega testa za hepatitis B
V medicinskem svetu velja, da je hepatitis B ena najbolj nevarnih v našem času.
Ta virus lahko prenaša ob stiku z okuženo kri - lahko so škarje za obnohtno kožico v salonu za nohte, medicinski instrumenti, zlasti instrumenti zobozdravnikov, ki niso bili podvrženi potrebni sterilizaciji, ali pa ni bila izvedena na zanesljiv način. Poleg tega se virus spolno prenaša.
Da bi ugotovili bolezen hepatitisa B, mora bolnik vzeti kri za analizo.
Kot je opisano zgoraj, se virus lahko prenese spolno, preko gospodinjstev, spada v hematogeni tip širjenja. Ko je virus okužen, vstopi v jetrne celice in se začne širiti po celem telesu. Virus se širi skozi obtočni sistem, je izjemno odporen na temperaturo in ohranja sposobnost, da škoduje živim celicam.
Katere krvne preiskave imate za hepatitis B?
V primeru, da je oseba doživela prve simptome bolezni hepatitisa B, se morate takoj posvetovati z zdravnikom in se testirati. Pri pregledu bolnika se odvzame kri, da se preizkusi. Kri se vzame na prazen želodec, zadnji obrok pa mora biti vsaj 8 ur nazaj.
Da bi ugotovili prisotnost bolezni v človeškem telesu, je treba opraviti tri vrste krvnih preiskav:
- Polimerizna verižna reakcija bo pokazala, ali je v celicah HB V DNA;
- Pregledati prisotnost beljakovin in antigena v bolnikovi krvi;
- Analize o prisotnosti beljakovin kažejo na poslabšanje bolezni.
Zdravniki zelo pogosto izvajajo klinične teste na več markerjih, da bi ugotovili popolno sliko bolezni.
Imunološki testi za hepatitis B
V tem obdobju so imunološki testi za hepatitis B zanesljivi, testi pa so namenjeni odkrivanju protiteles v krvi, ki se tvorijo v jetrih. Običajno testiranje na hepatitis B vključuje dekodiranje zbranih podatkov posameznih beljakovinskih celic. Med preskusom bodite pozorni na takšna protitelesa: t
- HBsAg - pogosto jih lahko najdemo na začetku okužbe, še preden se bolezen spusti. Pozitivni znak kaže, da je oseba okužena, čeprav je prišlo do pozitivnega rezultata pri popolnoma zdravi osebi. Rezultati so negativni v primeru, ko v bolnikovem telesu ni več kot 0,05 ie / ml, z večjo koncentracijo protiteles - analiza je pozitivna.
- HBeAg - ta protitelesa najdemo pri skoraj vseh okuženih bolnikih. Z dolgotrajno visoko koncentracijo protiteles v krvi postane bolezen kronična oblika. Pozitivni marker pomeni poslabšanje bolezni. Prisotnost prej omenjenih protiteles v telesu bolnika kaže, da bolezen napreduje in doseže vrh.
- Anti-HBc ima dve vrsti protiteles - l gG in lgM. Prisotnost protiteles lgM v krvi pomeni, da bolezen doseže najvišjo točko in se lahko spremeni v kronično obliko. Zdravniki morajo zagotoviti, da to protitelo ne poveča krvne slike. Na srečo je lgG dober, kar pomeni nastanek imunosti na virus hepatitisa B.
- Anti-HBe - protitelesa pravi, da bolezen poteka na običajen način in da se oblikuje imunost proti hepatitisu B v telesu bolnika.
- Anti-HBs - to pomeni, da je bolnik zdrav in da je njegov imunski sistem bistveno močnejši.
Odkrivanje HBV DNA s PCR
Za klinično študijo, ki bo pomagala ugotoviti, ali je bolnik okužen z virusom hepatitisa B, izberite metodo CRC. PCR pomeni polimerazno verižno reakcijo, s preučevanjem pa lahko ugotovimo prisotnost virusa v telesu.
Rezultati študije pomagajo ugotoviti prisotnost genskega patogena v jetrnih celicah. S pravilnim postopkom - se rezultati štejejo za zanesljive.
- Visokokakovostni RPC - pozitiven ali negativen rezultat. Ta postopek je obvezen za vse bolnike s sumom na okužbo s hepatitisom B. V primeru, da je virus v majhnih količinah v celicah DNK, ga ne bomo zaznali.
- Kvantitativni RPC. Ta študija ne bo pokazala le prisotnosti ali odsotnosti virusa, ampak tudi stopnjo okužbe. Z določitvijo stopnje bolezni lahko določite potrebno medicinsko terapijo.
Med drugim ROC pomaga natančno predpisati zdravljenje in celo prilagoditi odmerjanje zdravil. Določeno je tudi trajanje zdravljenja, v nekaterih primerih ga je mogoče prekiniti pred časom, drugi bolniki pa potrebujejo dodaten potek rehabilitacije.
Biokemični krvni test za hepatitis B
Za celovito sliko okužbe in poteku bolezni je potrebno opraviti biokemični krvni test. Ta študija bo pomagala določiti stanje notranjih organov pacienta in kako delujejo. Analize dajejo splošno sliko presnovnih procesov v telesu in prav tako govorijo o stopnji presnove.
Biokemična analiza bo pokazala tudi vse vitamine in elemente v sledovih, ki so potrebni za normalen boj telesa proti bolezni in za krepitev imunskega sistema.
Testi hepatitisa B se lahko opravijo na kateri koli kliniki, zasebni ali javni. Kadar se v človeškem telesu odkrije virus hepatitisa B, obstajajo take biokemične analize.
Kvantitativna analiza encima ALT (AlAt) t
Ta encim lahko najdemo v visokih koncentracijah, z razvojem ali kronično obliko okužbe z virusom hepatitisa B. Encim je v jetrih in se zaradi krvnega obtoka širi skozi vse posode.
Koncentracija snovi v telesu se nenehno spreminja zaradi analize, ki jo je treba opraviti enkrat na četrtletje. Zahvaljujoč ALT je mogoče raziskati ne le aktivnost virusa, ampak tudi oceniti obseg njenega negativnega učinka na jetra in organizem kot celoto.
Kvantitativna analiza AST-encima
Beljakovine so ena najpomembnejših snovi v človeškem telesu, vsi vitalni organi so zgrajeni iz nje, vključno s srcem. Pri bolezni hepatitisa B visoka stopnja AST kaže na fibrozo jeter.
Visoke stopnje kažejo na uničenje jetrnih celic. Za končno diagnozo je treba upoštevati razmerje med AST in ALT. Z visoko koncentracijo obeh encimov se razvije jetrna nekroza.
Bilirubin
Hemoglobin se razgradi v tkivih jeter in vranice, zaradi česar se pojavi snov, kot je bilirubin. Ta komponenta je osnova žolča. Bilirubin je lahko neposreden in posreden. Z visoko koncentracijo direktnega bilirubina v krvi je mogoče ugotoviti okužbo s hepatitisom B ali drugimi boleznimi jeter.
Visoka koncentracija ne-direktnega bilirubina v krvi govori o Gilbertovem sindromu. Poleg tega visoka koncentracija bilirubina kaže na slabo prehodnost žolčnih vodov. Ko je urin okužen s hepatitisom, postane temen, obraz in belje oči postanejo rumeni.
Albumin
Albumin je beljakovina, ki se sintetizira v jetrih. Pri nizkih koncentracijah beljakovin v telesu so jetrne celice poškodovane.
Skupaj beljakovin
Zmanjšanje koncentracije celotnih beljakovin v telesu bolnika kaže na kršitev jeter.
GGT (GGTP)
Ta encim zdravniki uporabljajo za odkrivanje zlatenice ali holecistitisa. Povišane vrednosti GGT kažejo na toksične poškodbe jetrnih celic, ki se lahko pojavijo kot posledica kroničnega alkoholizma ali zastrupitve z zdravili. Beljakovine so izjemno občutljive na alkohol in toksine, in ko so pretirane, se aktivnost beljakovin poveča.
Kreatinin
Presnova beljakovin poteka v jetrih, produkt te presnove v zdravilu pa se imenuje kreatinin. Ko se raven kreatinina zmanjša, se jetra upočasnijo.
Beljakovinske frakcije
Nizka raven beljakovinskih frakcij kaže na očitno kršitev jeter.
Dekodirna analiza za hepatitis B in vrednosti so normalne
Za diagnosticiranje virusa je treba izvesti številne različne študije. Rezultati vseh testov v kompleksu bodo dali jasno sliko o bolezni.
Bistvo analize PCR za hepatitis B in njene rezultate
Virusni hepatitis B se uspešno zdravi, če se pravočasno zazna in število protiteles in antigenov v krvi pacienta pravilno določi. S pomočjo encimskega imunskega testa za hepatitis je mogoče zaznati prisotnost virusnih označevalcev, vendar ne morejo določiti natančne stopnje procesa.
Za kvantitativno vrednotenje uporabimo PCR diagnostiko. S pomočjo testa je mogoče prešteti število markerjev, predvideti potek bolezni in verjetnost ozdravitve s pomočjo protivirusnih zdravil.
Glavna prednost študije je sposobnost zaznavanja tudi minimalnih koncentracij virusa, da se identificira patogen na stopnji vrste.
Diagnoza hepatitisa B
Virus hepatitisa B je zelo nalezljiv in odporen na zunanje vplive. V krvi bolnika ostane aktivna več tednov. Zato je vsaka oseba izpostavljena tveganju za okužbo, tudi če opazimo profilakso.
Za diagnosticiranje bolezni predpišejo naslednje študije:
Bistvo metode PCR
Ameriški kemik K.Mullis je prejel Nobelovo nagrado in njegova diagnostična metoda se še vedno uporablja.
Prednik metode PCR (verižna reakcija s polimerazo) velja za znanstvenika iz Norveške H. Kleppe. Najprej je začel izvajati ojačanje (obnovitev) DNK z uporabo kratke verige DNK, to je sintetične premaze (neke vrste kopijo).
Vendar pa znanstvenik svoje ideje ni uresničil. Podobne študije je naredil ameriški kemik K.Mullis, ki je leta 1993 prejel Nobelovo nagrado za svoj izum. Od takrat se PCR uporablja za ugotavljanje očetovstva, diagnosticiranje genetskih bolezni in odkrivanje virusov.
Bistvo reakcije je, da se s pomočjo encimov kopira določen kos DNK. Kopirate lahko samo območje, ki ustreza določenim parametrom, in če je v predstavljenem vzorcu. Za začetek reakcije se uporabljajo naslednje komponente:
- Matrična DNA s kopiranim mestom.
- Primeri so po strukturi podobni DNA.
- Polimeraza, to je encim, ki sproži reakcijo. Biti mora termostabilen, to je odpornost na ekstremne temperature.
- Raztopina z določenimi parametri, ki zagotavlja prehod reakcije.
Reakcija se izvaja v več fazah:
Za odkrivanje hepatitisa B se uporabljata dve vrsti reakcij: kvantitativna in kvalitativna.
Kvantitativna PCR
Kvantitativna metoda določa količino genoma HBV
Kvantitativna PCR vključuje istočasno ustvarjanje kopij fragmentov DNA in določanje števila molekul. Meritev se izvede po vsaki fazi, to je v realnem času. To se doseže z uporabo fluorescenčnih sond, ki so vključene v verigo molekul in žarijo v določenem obdobju študije.
Ta metoda se uporablja za odkrivanje fragmentov DNA, ki so markerji virusa hepatitisa. Z uporabo kvantitativne metode je mogoče natančno izolirati genotip virusa. Z drugimi besedami, izračunamo število kopij genoma HBV na številko celice bolnika.
Kvantitativna analiza daje odgovore na naslednja vprašanja:
- S kakšno intenzivnostjo bolezen napreduje.
- Kako učinkovito je zdravljenje.
- Ali se je razvila odpornost na zdravila?
Za diagnozo kronične stopnje okužbe je potrebna tudi kvantitativna meritev. Če je količina DNK pod 100 kosov / ml pri normalni ravni transaminaze, je oseba nosilec virusa.
V akutni fazi je količina protiteles veliko večja, pri protivirusnem zdravljenju pa povečanje števila protiteles kaže na razvoj odpornosti na zdravilo, kar je signal za prilagoditev zdravljenja.
Visoka kakovost PCR
Visokokakovostni PCR daje manj informacij, vendar lahko odpravi okužbo.
Visokokakovostna PCR lahko samo ugotovi prisotnost patogena v krvi. Če so odsotni, bolnik ni okužen, če patogen vstopi v kri, bo rezultat pozitiven.
Vendar pa je s pomočjo kvalitativne reakcije nemogoče pojasniti genom virusa, stopnjo bolezni. Zato je za diagnozo HBV izvedeno tako kvantitativno kot kvalitativno merjenje.
Priprava na raziskavo
Za analizo PCR je potrebna venska kri. To je treba storiti zjutraj na prazen želodec.
Bolnik se mora ustrezno pripraviti na študijo:
- 10 ur, da zavržete hrano, lahko pijete samo čisto vodo.
- Na predvečer prenehanja jemanja alkohola, za 4 ure, da ne kadijo.
- Pred pregledom se je treba izogibati fizičnemu in čustvenemu stresu.
- Prenehajte uporabljati zdravila 2 dni, če to ni mogoče, je treba obvestiti laboratorijskega tehnika. Nekatera zdravila vplivajo na končni rezultat.
Interpretacija podatkov
Pri kvantitativni reakciji se dobljeni kazalniki ovrednotijo glede na število kopij DNA.
Podatke o meritvah kakovosti je lahko razumeti. On daje bodisi pozitiven ali negativen odgovor.
Pri kvantitativni reakciji lahko dobljene kazalnike ocenimo glede na število kopij DNA. Merska enota je kopija / ml.
Podatki se dekodirajo na naslednji način:
- Če je količina HBV DNA manjša od 90, potem okužbe ni. Bolnik se je razvil po cepljenju ali pa je bil ozdravljen.
- Ko število izvodov 2x100 govori o nosilcu virusa.
- Število 2x106 označuje kronično fazo bolezni.
- Pri DNK več kot 2x109 ima bolnik akutno hepatitis.
Napačni rezultati
Prednosti diagnostične metode z uporabo polimeraznih reakcij so naslednje: t
- Neposredno odkrivanje patogenov. Nasprotno pa ELISA zagotavlja informacije o prisotnosti protiteles proti virusu.
- Specifičnost. To pomeni, da je regija DNA, ki je prisotna v vzorcu biomateriala, ki se kopira.
- Preobčutljivost. Metoda lahko celo zazna fragmente posameznih celic.
- Diagnoza bolezni v akutni in latentni fazi. To pomeni, da je možno diagnosticirati bolezen na stopnji predkliničnih manifestacij.
Metoda ima pomanjkljivosti, ki vodijo do napačnih rezultatov. Najpomembnejša pomanjkljivost je verjetnost kontaminacije materiala. Glavni vir kontaminacije so slabo obdelane epruvete, laboratorijske roke, reagenti.
Del DNK iz prejšnje reakcije lahko vstopi v kri. Zato so za laboratorije uvedene večje sanitarne zahteve: ločeni prostori, plastične cevi, ultravijolična obdelava laboratorijev itd.
Lažno negativni rezultati so lahko posledica zmanjšane občutljivosti reakcije. To se zgodi v naslednjih primerih:
- pacient jemlje zdravila, npr. antikoagulante;
- oseba je pred analizo utrpela fizični stres (športne aktivnosti, trdo delo);
- v zadnjem času.
Če ima bolnik veliko verjetnost okužbe in je rezultat študije negativen, ga je treba ponovno pregledati.
Glejte tudi:
Zaključek
Metoda polimerazne verižne reakcije je glavna in najbolj informativna za diagnozo HBV. Omogoča ne le ugotavljanje statusa nosilca okužbe, ampak tudi pojasnitev stopnje bolezni, ovrednotenje rezultatov zdravljenja.
Za natančnejšo diagnozo se uporabi kvalitativna in kvantitativna meritev. Slabosti metode so verjetnost kontaminacije, zmanjšana občutljivost in precej visoka cena.
Da bi bili rezultati najbolj zanesljivi, je treba ustrezno pripraviti na študijo in jo izvajati v kliniki z ustrezno licenco in dobrim ugledom.